蛋白质中二硫键的定位及其质谱分析_图文.doc

第２０卷第６期２００８年６月 化 学进展 ＰＲＯＧＲＥＳＳＩＮＣＨＥＭＩＳＴＲＹ Ｖ０１．２０Ｎｏ．６Ｊｕｎｅ，２００８ 蛋白质中二硫键的定位及其质谱分析＊ 仇晓燕１’２ 崔 勐１ （１．中国科学院长春应用化学研究所长春质谱中心 刘志强１ 刘淑莹Ｈ‘ 长春１３００２２；２．中国科学院研究生院 北京１０００３９） 摘 要 二硫键是一种常见的蛋白质翻译后修饰，对稳定蛋白质的空间结构，保持及调节其生物活性有 着非常重要的作用。因此，确定二硫键在蛋白质中的位置是全面了解含二硫键蛋白化学结构的重要方面。在众多实验方法中，现代质谱技术因其操作简单、快速、灵敏等优点而成为分析二硫键的重要手段。本文介绍了目前主要的定位二硫键的方法以及质谱在二硫键定位分析中的应用与进展。 关键词 二硫键定位质谱串联质谱三羧乙基膦稳定同位素标记 中图分类号：０６５７．６３；Ｑ５１ 文献标识码：Ａ文章编号：１００５．２８１Ｘ（２００８）０６．０９７５—０９ ＰｒｏｔｅｉｎＤｉｓｕｌｆｉｄｅＢｏｎｄＤｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎａｎｄＩｔｓＡｎａｌｙｓｉｓｂｙＭａｓｓＳｐｅｃｔｒｏｍｅｔｒｙ Ｑｉｕ Ｘｉａｏｙａｎｌ＇２ ＣｕｉＭｅｎ９１Ｌｉｕ劢ｉｑｉａｎ９１ＬｉｕＳｈｕ乒ｎ９１‘‘ （１．ＣｈａｎｇｃｈｕｎＣｅｎｔｅｒｏｆＭａｓｓＳｐｅｃｔｒｏｍｅｔｒｙ，ＣｈａｎｇｃｈｕｎＩｎｓｔｉｔｕｔｅｏｆＡｐｐｌｉｅｄＣｈｅｍｉｓｔｒｙ，ＣｈｉｎｅｓｅＡｃａｄｅｍｙｏｆＳｃｉｅｎｃｅｓ， Ｃｈａｎｇｃｈｕｎ１３００２２，Ｃｈｉｎａ；２．ＧｒａｄｕａｔｅＳｃｈｏｏｌｏｆｔｈｅＣｈｉｎｅｓｅＡｃａｄｅｍｙｏｆ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ，Ｂｅｉｊｉｎｇ１０００３９，Ｃｈｉｎａ） ＡｂｓｔｒａｃｔＤｉｓｕｌｆｉｄｅｂｏｎｄｓ ａｒｅｏｎｅ ｏｆｔｈｅｍｏｓｔｃｏｍｍｏｎｃｏｖａｌｅｎｔｐｏｓｔｔｒａｎｓｌａｔｉｏｎａｌｍｏｄｉｆｉｃａｔｉｏｎｓｏｆｐｒｏｔｅｉｎｓ．Ｔｈｅｙｐｌａｙ ａｎ ｉｍｐｏｒｔａｎｔｒｏｌｅ ｉｎ ｍａｉｎｔａｉｎｉｎｇ ｔｈｅ ｔｈｒｅｅ－ｄｉｍｅｎｓｉｏｎａｌｓｔｒｕｃｔｕｒｅｓ ｏｆｐｒｏｔｅｉｎｓ ａｎｄ ｔｈｅｉｒｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ ａｃｔｉｖｉｔｉｅｓ． Ｔｈｅｒｅｆｏｒｅ．ｔｈｅｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎｏｆｄｉｓｕｌｆｉｄｅｂｏｎｄｓｂｅｃｏｍｅｓａｎｉｍｐｏｒｔａｎｔａｓｐｅｃｔｆｏｒｏｂｔａｉｎｉｎｇａ ｃｏｍｐｒｅｈｅｎｓｉｖｅｕｎｄｅｒｓｔａｎｄｉｎｇ ｏｆｔｈｅｃｈｅｍｉｃａｌｓｔｒｕｃｔｕｒｅｏｆ ａ ｐｒｏｔｅｉｎ．Ｎｕｍｅｒｏｕｓｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌｍｅｔｈｏｄｓｈａｖｅｂｅｅｎｄｅｖｅｌｏｐｅｄｆｏｒｔｈｅ ｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎｏｆ ｄｉｓｕｌｆｉｄｅｂｏｎｄｓｉｎｐｒｏｔｅｉｎｓ．Ｍｏｄｅｒｎｍａｓｓｓｐｅｃｔｒｏｍｅｔｒｙｈａｓｄｅｖｅｌｏｐｅｄａｓ锄ｉｍｐｏｒｔａｎｔｔｏｏｌｆｏｒｔｈｅａｎａｌｙｓｉｓｏｆｄｉｓｕｌｆｉｄｅｂｏｎｄｐａｔｔｅｒｎｓｄｕｅｔｏｉｔｓ ａｄｖａｎｔａｇｅｓｏｆｂｅｉｎｇｓｉｍｐｌｅ，ｒａｐｉｄａｎｄｓｅｎｓｉｔｉｖｅ．Ｓｏｍｅｕｓｅｆｕｌｍｅｔｈｏｄｓｆｏｒａｓｓｉｇｎｍｅｎｔｏｆｄｉｓｕｌｆｉｄｅ ｂｏｎｄｓｉｎｐｒｏｔｅｉｎｓ ａｒｅ ｉｎｔｒｏｄｕｃｅｄ．ｔｈｅｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔｓａｎｄａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓｏｆｒｎａｓｓ ｓｐｅｃｔｒｏｍｅｔｒｙｉｎｔｈｉｓ ａｒｅａａｒｅ ｒｅｖｉｅｗｅｄ． Ｋｅｙｗｏｒｄｓ ａｓｓｉｇｎｍｅｎｔｏｆｄｉｓｕｌｆｉｄｅｂｏｎｄ；ｌｌｌ越Ｓｓｐｅｃｔｒｏｍｅｔｒｙ；ＭＳ／ＭＳ；ＴＣＥＰ；ｓｔａｂｌｅ ｉｓｏｔｏｐｅｌａｂｅｌｉｎｇ １ 引言 二硫键广泛存在于原核和真核生物的激素、酶、 免疫球蛋白、血浆、抑制剂和毒液等蛋白质中，是一种常见的蛋白质翻译后修饰。二硫键作为共价键交联多肽链内或链间的两个半胱氨酸，对稳定蛋白质的空间结构¨－５】、维持正确的折叠构象№’７］、保持及调节其生物活性¨－１训等都有着举足轻重的作用。因此，确定二硫键在蛋白质中的位置对于鉴定蛋白质一级结构有着重要的意义，是研究含有二硫键结构的活性多肽／蛋白质化学结构的重要方面。定位二 收稿：２００７年７月，收修改稿：２００７年９月 ＊国家自然科学基金项目（Ｎｏ２０６７５０７９）资助 ＊＊通讯联系人ｅ．衄ｉｌ：ｓｙｌｉｕｌ９＠ｙａｈｏｏ．ｔｏｍ．ｃａ 硫键还将有助于我们进一步揭示蛋白的高级结构及其生物功能¨“，指导定向化学合成和审评基因工程重组蛋白的折叠¨２叫引，便于Ｘ射线晶体衍射法（ｘ． ｒａｙ ｃｒｙｓｔａｌｌｏｇｒａｐｈｙ）的三维结构研究¨纠以及为通过核 磁共振波谱法（ＮＭＲ）正确解析溶液中的构象奠定基础㈨。 当蛋白质分子中存在二硫键时，在完成其氨基酸测序