反义核酸药物剖析.ppt

2 、稳定性 ( ｓｔａｂｉｌｉｔｙ ) asON 的功能在很大程度上取决于其稳定性 ,asOD 在体内生理条件下 , 很容易被各种核酸酶降解 , 这样就根 本无法达到阻遏ｍＲＮＡ翻译的目的。因此 , 人们对反 义核酸的结构进行各种 化学修饰 以提高其稳定性 , 增加 对核酸酶的抗性。 碱基是 asON 与靶基因通过氢键形成而直接接触的 部位 , 而氢键的形成又是 asON 发挥功能的必要条件。因 此 , 该部位的修饰应以不影响氢键形成为前提。任何影 响 A-T （ U ） /G-C 碱基配对的修饰都会因碱基错配而导 致 asON 与靶基因的结合或特异性降低或丢失。 如： 1 、在胞嘧啶的 5 位点甲基化（最常使用） 2 、使用三氟甲基、咪唑丙基、炔丙基等。 （ 1 ）碱基修饰： DNA chain -CH 3 （ 2 ）骨架修饰 第 1 条途径 ------- 磷的修饰 : 磷原子是核酸酶的主要攻击位点 , 修饰后效果明显。 磷的修饰包括硫代、甲基化、氨化、酯化等 , 尤以 硫代 磷酸寡核苷酸 (phosphoroth-ioteoligonucletide,PS-ODN) 最为常用 , 称为“第一代反义药物”。 PS-ODN 是至今研究最深入、应用最广泛的一类 asODN ，它有效增强了对核酸酶稳定性、具有良好的 水溶性及易于大量合成，基本能满足临床治疗的需要。 PS-ODN 与天然 ODN 相比： ? 通过细胞内吞作用进入细胞内平衡所需时间更长最 终细胞内浓度也更高； ? t1/2 一般都大于 24h ，极大的提高了对核酸酶的耐受 力； 但由于 PS- ODN 其本身带有大量的负电荷，能与 多种因子结合从而导致非特异效应。在体内表现出剂 量依赖的毒副作用。 第 2 条途径 ------ 糖环修饰 : 糖环修饰包括 α 构型、 1 位取代、 2 位取代、 3 - 3 ′ 连接、 5 ＿ 5 ′ 连接等。原理是使核酸酶不能有效识别 磷酸二酯键。 ? α 构型修饰 : 是指将天然ＤＮＡ或ＲＮＡ的 β 型糖苷键替 换成 α 构型 , 使核酸酶不能有效地识别其磷酸二酯键。 ? 1 位取代、 2 位取代 : 指将戊糖的 1 ′ 2 ′ 位引入某些取代基。 如烷基、烷化剂等。嵌入特殊功能分子后 , 也使 as ＯＮ具 备更强的核酸酶抗性，但不影响亲和力。 ? 3 ′ ＿ 3 ′ 5 ′ ＿ 5 ′ 连接修饰 : 考虑到核酸酶只识别 3 ′ ,5 ′ 磷酸二 酯 键 , 故 合 成 一 类 具 有 3 ′ ＿ 3 ′ 5 ′ ＿ 5 ′ 颠 倒 连 接 末 端 的 asON( ＩＮＶ＿ asON), 结果使核酸酶不能识别。 第 3 条途径 ----- 肽骨架 基于 asON 发挥特异性抑制基因表达的关键在于其 碱基排列顺序 , 而与易于降解的磷酸和糖环组成的磷酸 二酯键骨架无关。所以 ,asOD 的 磷酸 - 糖骨架 以 肽键 取代， 得到新型的化合物 ---- 多肽核酸 ( ｐｅｐｔｉｄｅ ｎｕ ｃｌｅ ｉｃ ａｃｉｄ , ＰＮＡ ) 。 由于结构上 PNA 与 DNA 类似，其两相邻碱基间距 及碱基与类肽链骨架间的距离均相近， PNA 与 DNA 以 及 RNA 与 PNA 之间均可形成碱基配对。 假肽取代磷酸二酯键后其： 特异性更强， 带电荷少、 不被蛋白酶和核酸酶识别 , 亲和性更高 , 副作用减少。 具有比前两代反义寡核苷酸更好的亲和力和至少 相同的序列特异性，而且也有相当的抗病毒活性。 称 为第三代反义核酸。 近来这种肽核酸研究很多。 即综合应用多种化学修饰 , 效果很好 , 有 “第二代 反义药物”之称 。它以 PS-ODN 为核心，两翼序列上 的核糖的 2 位被其它基团修饰。除了化学修饰，还可 以试作转基因表达反义核酸，在体细胞内以 DNA 为模 板转录产生 , 模拟天然ＲＮＡ的