醋酸纤维薄膜电泳培训教材.pptVIP

实验五;一、目的 掌握醋酸纤维薄膜电泳法分离血清蛋白的原理和 方法 二、原理 血清中含有多种蛋白质，其等电点均低于pH7.0 在pH 8.6的缓冲液中，它们电离出负离子，带正电荷，在电场中向正极移动 各种蛋白质的等电点不同，在同一pH值下所带电荷量不同 分子的大小不同，因此在电场中的泳动速度不同，这样可将各种血清蛋白质分离开 ;三、实验材料及设备 1、样品：新鲜牛血清（无溶血） 2、仪器：DYY-Ⅲ2型常压电泳仪、卧式电泳槽 3、器材：醋酸纤维薄膜(8×2cm) ；点样器；培养皿； 滤纸；直尺、铅笔；镊子；剪刀；和铅笔 4、试剂：pH8.6巴比妥-巴比妥钠缓冲液 漂洗液 染色液 ;四、操作步骤 3、点样 点样模板的制作 取出浸透的薄膜，夹在两层滤纸内吸干多余的缓冲液，无光面朝上放在点样模板上 在点样器上均匀地沾上血清，将点样器轻轻地印在点样区内 4、电泳 将点样端的薄膜平贴在阴极电泳槽支架的滤纸桥上，另一端平贴在阳极端支架上 连接好电泳仪，接通电源，调节电压为100V，电流为0.6 mA×2×n，电泳60min ;四、操作步骤 5、染色与漂洗脱色 染色:电泳完毕后将膜条取下并放在染色液中浸泡10min 漂洗脱色:将膜条从染色液中取出后，移置到漂洗液中，反复漂洗数次，直