细胞生物学 细胞核与染色体.pptVIP

二、染色质的基本结构单位 — 核小体 1974 年 Kornberg 等人根据电镜观察和染色质的酶切降解，发现 核小体（ nucleosome ）是染色质包装的基本结构单位，并提出 染色质结构的“串珠“模型。 用温和的方法裂解细胞核，将染色质铺展在电镜铜网上，通过电 镜观察，未经处理的染色质自然结构为 30nm 的纤丝，经盐溶液处理后 解聚的染色质呈现一系列核小体彼此连接的串珠状结构，念珠的直径 为 10nm （ 1 ）电镜实验证据 （ 2 ）核酸酶水解从大鼠肝细胞中分离的染色质 用非特异性微球菌核酸酶消化染色质时，经过蔗糖梯度离心及琼脂糖凝胶电 泳分析，发现绝大多数 DNA 被降解成大约 200bp 的片段；如果部分酶解，则 得到的片段的大小是 200bp 的整数倍。 Gel electrophoresis after removal of chromatin proteins Analyzed by electron microscopy The basic repeat unit, containing an average of 200bp of DNA associated with a protein particle, is the nucleosome （ 3 ）应用 X 射线衍射、中子散射和电镜三维重建技术，研究染色质结晶颗 粒 核小体颗粒是直径为 11nm 、高 6.0nm 的扁园柱体，核心组蛋白的构成是先形 成（ H3 ） 2, （ H4 ） 2 四聚体，然后再与两个H2A﹒H2B异二聚体结合形成八聚体。 3-D of nucleosome Nature 389:251, 1997 用 SV40 病毒感染细胞，病毒 DNA 进入细胞后，与宿主的组蛋白结合，形成串珠状微小染色 体，电镜观察 SV40 DNA 为环状，周长 1 500nm ，约 5.0kb 。若 200bp 相当于一个核小体，则可形 成 25 个核小体，实际观察到 23 个，与推断基本一致。 （ 4 ） SV40 微小染色体（ minichromosome ）分析。 1. 每个核小体单位包括 200bp 左右的 DNA 超螺旋、一个组蛋白八聚体 和一分子 H1 。 核小体的结构要点 : 2. 由 H2A 、 H2B 、 H3 、 H4 各两分子形成八聚体，构成核心颗粒。 (H2A-H2B)- (H3-H4)-(H3-H4) -(H2A-H2B) 15-50bp 3. DNA 分子以左手螺旋缠绕在核心颗粒表面，共 1.75 圈，约 146bp ，组蛋 白 H1 在核心颗粒外结合额外 20bpDNA ，锁住核小体 DNA 的进出端，起稳定核 小体的作用。 Core particle 4. 两个相邻核小体之间以连接 DNA （ linker DNA ）相连 5. 组蛋白与 DNA 之间的相互作用主要是结构性的，基本不依赖 于核苷酸的特异序列。 Rich in positively charged basic amino acids, which interact with the negtively charged phosphate groups in DNA 6. 核小体沿 DNA 的定位受不同因素的影响，进而通过核小体相位 改变影响基因表达 如非组蛋白与 DNA 特异性位点的结合，可影响邻近核小体的相位； 球状组蛋白核心 H 4 DNA 双螺旋 (140-160bp 、 1.75 圈） H 3 H 4 H 3 H 2 A H 2 A H 2 B H 2 B H 4 H 3 H 3 H 4 H 2 A H 2 A H 2 B H 2 B ? 10nm 连接 DNA （ 50-60bp ） H 1 H 1 核 小 体 核心部 连接部 DNA 分子： 140-160bp 、 1.75 圈 组 蛋 白： 2 （ H 2 A 、 H 2 B 、 H 3 、 H 4 ） 组 蛋 白： H 1 DNA 分子： 50 — 60bp 八聚体 核 小 体 DNA 被压 缩 7 倍 染色质的结构 ? 染色质包装的多级螺旋模型 (multiple coiling model) ● 染色体的骨架 -