实验 8 原生质体游离与体细胞融合.pptVIP

植物组织培养实验技术 北京林业大学 2015-5 实验八 原生质体游离与体细胞融合 一 实验目的 通过观察落从叶肉分离出的原生质体，了解植 物原生质体分离和体细胞杂交的基本方法。 二 实验内容 1. 原生质体的分离 ? 原生质体来源：叶片、愈伤、细胞悬浮培养物 ? 分离原生质体：机械法、酶解法 ? 影响因子：前处理、酶处理、渗透压 ? 原生质体净化：过滤、沉降法、漂浮法、界面法 2. 原生质体的融合 ? 自发融合 ? 诱导融合： NaNO 3 处理 高 pH/ 高浓度钙处理 PEG 处理 电融合 融合前 融合中 聚乙二醇（ PEG) 介导的体细胞融合 PEG 带微弱极性的负电荷，能与水、蛋白质和碳水化合物等具有 正电荷基团的分子形成氢键。 当 PEG 分子链足够大时，在邻近原生 质体表面之间起着分子桥的作用 ，引起原生质体紧紧粘连成团。 Ca 2+ 在蛋白质或磷脂负电荷基团和 PEG 之间形成桥梁，加强原生质 体之间的粘连作用。在洗涤过程中，直接或间接