2.2.1 动物体细胞核移植技术.ppt

动物体细胞核移植技术 教学目标 新课标要求 简述动物细胞培养的过程、条件及应用。 简述通过动物体细胞核移植技术克隆动物的过程和应用前景。 教学重点 动物细胞培养的过程及条件。 用动物体细胞核移植技术克隆动物的过程。 教学难点 用动物体细胞核移植技术克隆动物的过程。 动物胚胎或幼龄动物的组织、器官 细胞悬浮液（原代细胞） 10代细胞 40~50代细胞 无限增殖 传代培养 单个细胞 加培养液 原代培养 胰蛋白酶 剪碎 细胞株 细胞系 原代培养：第1代细胞传至10代左右 传代培养：将原代细胞从培养瓶中取出，分装到两个或两个以上的培养瓶中继续培养。 细胞株：10到40、50代的细胞，遗传物质没发生改变。 细胞系：超过50代的细胞，遗传物质发生改变，失去接触抑制，可无限增殖。 回顾： 等同于 癌细胞 寻根问底 1.进行动物细胞传代培养时用胰蛋白酶分散细胞，说明细胞间的物质主要是什么成分？用胃蛋白酶行吗？ 细胞间的成分主要是蛋白质。 不行，胃蛋白酶适宜的PH约为2，当PH6时，胃蛋白酶就会失去活性，而胰蛋白酶适宜PH为7.2---8.4，多数动物细胞培养的适宜PH为7.2---7.4。胃蛋白酶在此环境中没有活性，胰蛋白酶在此环境中活性较高，因此胰蛋白酶适宜用于细胞培养时的消化。 2.胰蛋白酶真的不会把细胞消化掉吗？为什么？ 细胞膜成分：磷脂和蛋白质 长时间的作用也会消化细胞膜蛋白，对细胞有损伤作用。 因此必须控制好胰蛋白酶的消化时间。 3.目前使用的或冷冻保存的正常细胞为几代以内的？ 10代以内，以保持细胞正常的二倍体核型。 5、为什么培养前要将组织细胞分散成单个细胞？ 6、动物细胞培养能否像绿色植物组织培养那样最终培养成新个体？ 成块组织不利于培养，分散了并制成细胞悬浊液，利于细胞与培养液充分接触，利于培养。 不能，动物细胞培养只能使细胞数目增多。 动物细胞培养的目的是获得细胞或细胞产品。 4、为什么选用动物胚胎或幼龄个体的器官或组织做动物细胞培养材料？ 分化程度低,分裂和增殖旺盛，易培养 思考 一、动物细胞培养条件 1、无菌、无毒的环境 2、营养 3、温度和PH 温度36.5+0.5度，pH7.2～7.4 4、气体环境 O2和CO2（95%空气和5% CO2 ） 维持培养液的PH 培养液和所有培养用具进行无菌处理 措施：培养液中加一定量的抗生素。 葡萄糖、氨基酸、无机盐、微量元素、促生长因子（维生素、激素等）和 动物血清 较植物组织培养基，动物细胞培养液的独特之处？ ①液体培养基 ②成分中有动物血清等 想一想 为什么对动物细胞进行培养时要添加血清？ 血清中含有蛋白质、氨基酸、葡萄糖、激素等，其中蛋白质为白蛋白和球蛋白；氨基酸有多种，是细胞合成蛋白质的基本成分，有些动物细胞不能合成，必须由培养液提供；激素有胰岛素、生长激素等促进细胞的生长、增殖、贴附，还有很多未知的促细胞生长因子等其他活性物质。因此，细胞培养要保证细胞能顺利生长和繁殖，一般要添加10%----20%的血清。 二、动物细胞培养技术的应用 1.生产蛋白生物制品：病毒疫苗、干扰素、单克隆抗体等 2.基因工程技术中的受体细胞。 3.用于检测有毒物质。 4.培养正常或病变的细胞，用于生理、病理、药理等方面的研究。可用于健康细胞的培养，如获得大量自身的皮肤细胞，用于植皮；用于筛选抗癌药物等，为治疗和预防疾病提供理论依据 细胞的全能性 细胞株、细胞系 植物体或组织 培养结果 获得细胞 或细胞产物 快速繁殖、培育无病毒植株等 培养目的 葡萄糖、动物血清 蔗糖、植物激素 培养基特有成分 液体培养基 固体培养基 培养基性质 细胞增殖 原理 动物细胞培养 植物组织培养 比较项目 植物细胞和动物细胞培养的比较  动物细胞特点？ 分化潜能变窄：随着细胞分化程度的提高而逐渐受到限制，分化潜能变窄，这是指整体细胞而言。 细胞核仍具有全能性：细胞核，它含有保持物种遗传性所需的全套基因，而且并没有因细胞分化而丢失基因，因此高度分化细胞的细胞核仍具有全能性 想一想？ 根据动物细胞核仍具有全能性的特点,怎样将动物细胞的全能性表达? 利用动物体细胞核移植技术 再想一想？ 动物核移植： 将动物的一个细胞的细胞核，移入一个已经去掉细胞核的卵母细胞中，使其重组并发育成一个新的胚胎，这个新的胚胎最终发育为动物个体。 用核移植的方法得到的动物成为克隆动物。 三、动物体细胞核移植技术 动物克隆包括两个过程：核移植和胚胎移植 克隆=无性繁殖 1.分类 黑面绵羊去核卵细胞 白面绵羊乳腺细胞核 细胞核移植 重组细胞 电脉冲刺激 早期胚胎 胚胎移植 另一头绵羊的子宫 妊娠