医学专业论文详细开题报告.docVIP

医学专业论文详细开题报告 目录 一、立题依据 T/Hmdash;钙粘蛋白与肿瘤的发生、发展有着密切的联系,也许它会为肿瘤的诊断和治疗带来新的契机. T-钙粘蛋白是否对恶性黑色素瘤也有作用 二、研究内容及预期成果 T-钙粘蛋白基因转染入黑色素瘤细胞后观察对其增殖和转移活性的抑制情况 三、研究方案 1.材料：从正常人皮肤切取的痣组织，人黑色素瘤细胞株 2.主要试剂和溶液 (1)第一抗体：兔抗人T-cadherin 抗体 (2)第二抗体：生物素标记羊抗兔IgG (3) “三抗” ：链亲和霉素标记HRP 3.设备 4.方法 (1)冷冻切片的免疫染色程序 (2)活细胞的免疫染色程序 5.荧光显微镜检 1.材料： (1)组织和细胞 (2)菌株与质粒 (3)工具酶 (4)试剂 (5)仪器 2.方法 (1)引物的设计 (2)总RNA的提取：异硫氰酸胍-酚-氯仿抽提一步法 (3)甲醛变性琼脂糖凝胶电泳分析其质量，观察所提RNA有无明显降解; (4)逆转录RT反应 ：为了证实RT反应的成功设管家基因GAPDH为内对照 (5)PCR扩增 ：利用上下游引物 (6)PCR产物的回收、纯化 (7)PCR产物的克隆 (8)DNA序列测定 (9)真核重组表达质粒的构建 (10)阳性重组质粒的鉴定和筛选 (11)质粒的大量提取 (12)转染黑色素瘤细胞 1.材料 2.方法 (1)转染细胞的培养 (2) Wester