第二章 种子的扩大培养 文档资料.pptVIP

? 种子制备的过程 ? 影响种子质量的因素 ? 种子制备的放大原理与技术 第五章 种子的扩大培养 ? 将 冷冻干燥管 、 砂土管 中处于休眠状态的工业 菌种接入试管 斜面 活化后，再经 摇瓶 及 种子罐 逐级扩大培养而获得一定数量和质量的纯种的 过程。这些 纯培养物 都称为种子。 什么叫种子？ 种子扩大培养的任务 ? 工业生产规模的增大 需要种子就增多 种子 要进行扩大培养 ? 种子扩大培养的任务：提供发酵产量高、性能稳 定、接种数量足够的、纯的培养物。 种子扩大培养流程图 孢子制备 种子制备 一、种子制备的过程 孢子制备 放线菌孢子的制备 ? 放线菌的孢子培养一般采用琼脂斜面培养基，培养 基中含有一些 适合产孢子的营养成分 ，如 麸皮、豌 豆浸汁、蛋白胨和一些无机盐 等。 ? 碳源和氮源不太丰富 （ 碳源约 1% ， 氮源不超过 0.5% ）。碳源丰富易造成生理酸性的营养环境，不 利于放线菌孢子形成；氮源丰富有利于菌丝繁殖不 利于孢子形成。 ? 斜面培养温度大多 28 ℃ ，培养时间 5~14 天 放线菌发酵生产的工艺过程 菌种进入种子罐有两种方法 ? 一种为孢子进罐法 ? 一种方法为摇瓶菌丝进罐法 霉菌孢子的制备 ? 霉菌的孢子培养，一般以 大米、小米、玉米、 麸皮、麦粒 等天然农产品为培养基。这是由于 这些农产品中的营养成分较适合霉菌的孢子繁 殖，而且这类培养基的表面积较大，可获得大 量的孢子。 ? 霉菌的培养一般为 25 ～ 28 ℃ ，培养时间为 4 ～ 14 天。 细菌孢子的制备 ? 细菌斜面培养基多采用 碳源限量而氮源丰富 的 配方。 牛肉膏、蛋白胨 常用作有机氮源 ? 细菌培养温度的大多数 37 ℃ ，少数为 28 ℃ ? 细菌菌体培养时间一般 1 ～ 2 天 ，产芽孢的细菌 则需培养 5 ～ 10 天 种子制备 摇瓶种子制备 ◆ 某些孢子发芽和菌丝繁殖速度缓 慢的菌种，需将孢 子经 摇瓶培养成菌丝 后再进入种子罐，这就是摇瓶种 子。 ◆ 一般采用 母瓶、子瓶两级培养 ，有时母瓶也可直 接进罐。 ◆ 要求培养基 营养丰富完全 ， 氮源丰富 有利于菌丝 生长；各种营养成分不宜过浓， 子瓶比母瓶略高， 更接近种子罐的培养基配方 举例： ◆ 产链霉素的灰色链霉菌（ S. griseus ）、产卡那霉 素的卡那链霉菌（ S. Kanamuceticus ）可以用摇瓶液 体培养法。将孢子接入含液体培养基的摇瓶中，于 摇瓶机上恒温振荡培养，获得菌丝体，作为种子。 其过程如下： 试管 → 三角瓶 → 摇床 → 种子罐 种子罐种子制备 ◆ 种子罐种子制备的工艺过程，因菌种不同 而异，一般可分为 一级种子、二级种子和三 级种子 的制备。 ◆ 孢子 ( 或摇瓶菌丝 ) 被接入到体积较小的 种子 罐 中，经培养后形成大量的菌丝，这样的种子 称为 一级种子； 把一级种子转入发酵罐内发酵， 称为 二级发酵，如谷氨酸发酵；三级发酵：青 霉素和链霉素；四级发酵 。。。 种子罐培养： ? 获得足够的菌种数量； ? 种子罐的培养基接近发酵罐培养的醪液成分和 培养条件，使菌体适应发酵环境 。 种子罐级数的确定 种子扩大的级数：制备种子需逐级扩大培养的次 数 ? 种子罐级数越少，越有利于简化工艺和控制，并 减少由于多次转种而带来的染菌机会以及减少因 种子罐生长异常而造成的发酵波动 ? 但考虑能否在一定时间内获得优质、足量的种子 以满足发酵的需求 确定方法 菌种的性质 ( 如菌种传代后的稳定性 ) 瓶中的孢子数，孢子发芽及菌丝繁殖速度 发酵罐中种子培养液的最低接种量 种子罐与发酵罐的容积比 生产规模 随工艺条件的改变作适当的调整 举例： ? 细菌 ：生长快，种子用量比例少，级数也较少，二级发酵。 茄子瓶→种子罐→发酵罐 ? 霉菌 ：生长较慢，如青霉菌，三级发酵 孢子悬浮液→一级种子罐（27℃,40小时孢子发芽，产 生菌丝 ）→二级种子罐（27℃， 10~24 小时，菌体迅速繁 殖，粗壮菌丝体）→发酵罐 ? 放线菌 ：生长更慢，采用四级发酵 ? 酵母 ：比细菌慢，比霉菌，放线菌快，通常用一级种子 二、影响种子培养的条件 1 、营养条件 （ 1 ）原材料质量 ● 如微量元素 Mg 2+ 、 Cu 2+ 、 Ba 2+ 能刺激