生物技术讲义(第2章).pptVIP

＊＊ 第二章 培养基 合成培养基：只含有化学成分已知的化合物的培养基。 培养基中无机成分和有机成分的浓度单位： 习惯用法 mg/L, 国际植物生理学会 mmol/L 第一节 培养基成分 一.无机营养成分  1. 大量元素: 碳、氢、氧、氮、磷、硫、钙、钾、镁 2. 微量元素: 铁、锰、铜、锌、硼、钼 根据国际植物生理学会建议，植物所需元素的浓度 大于 0.5mmol/L —— 大量元素 小于 0.5mmol/L —— 微量元素 二. 有机营养成分 1.含氮物质 2.碳源 3.维生素类 含氮物质： 甘氨酸 谷氨酸 精氨酸 丝氨酸 丙氨酸 半胱氨酸 水解酪蛋白、水解乳蛋白（多种氨基酸的混合物） ①马铃薯：多用于壮苗的培养，其用量通常为100—200g/L。对培养基的pH产生缓冲作用。 ②香蕉：多用于兰花的组织培养，其用量通常为150—200g/L。香蕉果泥能够缓冲培养基的pH，对外植体的分化有着较为明显的促进作用。 ③椰乳：缩写为CM。可用于很多较难培养的植物材料的培养基中，使用浓度通常为100—200mL／L。培养结果表明，未经过加热灭菌的椰乳对外植体的生长效果比经过加热灭菌的椰乳更为明显。 碳 源： 维生素以辅酶的形式参与多种酶反应，影响蛋白质、糖、脂肪等物质的代谢活动，促进离体组织的生长。 在组织培养中，维生素的使用浓度通常为0.1～lmg／L。 盐酸吡哆醇(维生素B6) 生物素(维生素H) 盐酸硫胺素(维生素B1) 抗坏血酸(维生素C) 烟酸(维生素B5) 叶酸(维生素B11) 三.植物激素 1.生长素类： 影响植物茎和节间的伸长、向性、顶端优势、叶片脱落和生根；组织培养中诱导细胞分裂和根分化。 2.细胞分裂素类： 影响植物细胞分裂、顶端优势的变化和茎芽分化等；组织培养中，促进细胞分裂、由愈伤组织和器官分化不定芽。 3.赤霉素和脱落酸 诱导愈伤组织的产生，促进细胞脱分化； 促进细胞的伸长； 促进生根。 增加细胞壁的可塑性，从而促使细胞的伸长。 a.促进细胞分裂和扩大(与生长素促进细胞伸长的作用不同)，可使茎增粗，而抑制茎伸长； b.诱导芽的分化，促进侧芽萌发生长； c.抑制衰老，减少叶绿素的分解。延缓离体组织或器官的衰老过程，有保鲜的效果。 细胞分裂素对根的生长一般起抑制作用。 四.固化剂及其它成分 固化剂: 琼脂、琼脂糖、植物凝胶（卡拉胶） 其它成分:活性碳、硝酸银、抗生素 琼脂： 活性炭： 五. pH值 a. 经高温高压灭菌后，培养基的PH会下降0.2—0.8，故调整后的PH应高于目标pH0.5个单位； b. pH的大小会影响琼脂的凝固能力，一般当pH大于6.0时，培养基将会变硬，低于5.0时，琼脂就不能很好地凝固。 第二节 培养基的选择与制备 * 一. 常用培养基 White; Heller; MS; ER; B5 ; Nitsch; N6 二. 广谱实验法 培养基中所有组分分为4类： 无机盐、生长素、细胞分裂素、有机营养物质 每类物质选定3个浓度（低L、中M、高H），组成81个处理的实验，每种组合用4个字母表示，筛选出培养基后，再筛选生长素和细胞分裂素，找到最好的类型。 三. 培养基制备方法 干粉培养基 配制培养基 a 直接制备； b 制备贮备液再稀释； 母液的配制和保存 母液配制要求 1.母液浓缩倍数：大量元素10倍 微量元素、铁盐、有机物可配成100~200倍母液 2.选用蒸馏水、重蒸馏水、分析纯或化学纯试剂 3.防止沉淀 4.激素母液浓度：1mg/ml，1次配成50或100 ml 5.激素溶解： 注意事项 硫酸镁(MgSO4 2H20)和氯化钙(CaCl2 2H20)要分别单独配制。 高浓度的Ca+2和Mg+2与磷酸盐混合，会产生不溶性沉淀。但定容后，沉淀即会消失。 KI可以单独配成母液。 铁盐一般用硫酸亚铁(FeSO4 7H20)和乙二胺四乙酸二钠(Na2—EDTA)配制，以防止铁在高压灭菌过程中失效。 制备贮备液再稀释 溶解琼脂和蔗糖到终体积的3/4，解热溶解； 加入预制的贮备液； 加蒸馏水至终体积； 调节pH值； 分装培养基； 加棉塞等包装； 灭菌； 冷却后备用。 灭菌后的培养基应尽快地转移培养瓶使其冷却。 培养基一般应在1～2周内用完，短时间可存放于室温条件，如不能尽快用完，最好储藏在4—10℃、无尘、避光的条件下。 已经配制好的培养基最好经过3天的预培养，