PCR技术的应用【方案】.pptVIP

PCR技术的应用 精选 1、PCR技术在分子生物学中的应用 精选 一：基因克隆 基因的克隆和分离是分子生物学和细胞生物学研究中必不可少的手段。运用PCR技术进行基因克隆和亚克隆比传统的方法具有更大的优点。由于PCR可以对单拷贝的基因放大上百万倍，产生微克(pg)级的特异DNA片段，从而可省略从基因组DNA中克隆某一特定基因片段所需要的DNA的酶切、连接到载体DNA上、转化、建立DNA文库及基因的筛选、鉴定、亚克隆等烦琐的实验步骤。 精选 二：重组PCR 在分子生物学研究中常常需要将两个不同的基因融合在一起。通过PCR反应可以比较容易地实现这一目的。 精选 三：DNA序列的测定 目前广泛采用的DNA测序方法有化学法和双脱氧法两种，它们对模板的需要量比较大。传统的模板制备方法是将含目的基因的DNA片段进行酶切，建立基因库，筛选克，并亚克隆到M13噬菌体载体上，经噬菌体产生单链DNA。这是一项比较复杂的工作。利用PCR方法可以比较容易地测定位于两个引物之间的序列。 精选 四：用于基因定量 应用PCR技术可以定量监测标本中靶基因的拷贝数，这在研究基因的扩增等方面具有重要意义，这种方法称为差示PCR(differential PCR)。它是将目的基因和一个单拷贝的参照基因置于同一个试管中进行PCR扩增。电泳分离后呈两条区带，比较两条区带的丰度；或在引物5’端标记上放射性核素后，通过检