11DNA重组技术的基本工具文.ppt

乳汁中含有人生长激素 的转基因牛 ( 阿根廷 ) 转鱼抗寒基因 的番茄 转基因抗虫棉 抗虫棉 普通棉 DNA 重组技术的基本工具 1. 复习：（ 1 ）基因工程的概念 基因工程又叫做 基因拼接技术 或 DNA 重组技术 。通俗地说， 就是按照人们的意愿，把一种 生物的某种 基因 提取出来，加 以 修饰改造 ，然后放到另一种 生物的细胞里， 定向地 改造生 物的遗传性状。 基因工程的别名 操作环境 操作对象 操作水平 基本过程 实质 结果 基因拼接技术或 DNA 重组技术 生物体外 基因 DNA 分子水平 人类需要的基因产物 剪切 → 拼接 → 导入 → 表达 基因重组 （ 2 ）有关基因工程概念理解 2. 复习：（ 1 ）基因工程培育抗虫棉的简要过程 普通棉花 ( 无抗虫特性 ) 苏云金芽孢杆菌 提取 抗虫基因 与运载体 DNA 拼接 导入 棉花细胞 ( 含 抗虫基因 ) 棉花植株 ( 有 抗虫特性 ) 问题 1 ：上述培育抗虫棉的关键步骤是什么？ （ 2 ）基因工程培育抗虫棉的关键步骤： 关键步骤一： 抗虫基因从苏云金芽孢杆菌 细胞内 提取出来 关键步骤二： 抗虫基因 与运载体 DNA 连接 关键步骤三： 抗虫基因 导入受体 ( 棉花 ) 细胞 问题 2 ： 解决培育抗虫棉的关键步骤需要哪些工具？ 关键步骤一的工具： 关键步骤二的工具： 关键步骤三的工具： 基因的 剪刀 —— 限制酶 基因的 针线 —— DNA 连接酶 基因的 运载工具 —— 运载体 DNA 重组技术的基本工具 本节知识内容 § 1 DNA 重组技术的基本工具 新授课：专题一 基因工程 “ 分子手术刀” ── 限制酶 “ 分子缝合针” ── DNA 连接酶 “ 分子运输车” ── 基因进入受体细胞的载体 识别双链 DNA 分子的某种 特定的核苷酸 序列 ，并且使每一条链中 特定部位 的两 个核苷酸之间的 磷酸二酯键 断开。 主要是从 原核生物中分离纯化 4000 种。 1 、来源： 2 、种类： 3 、作用： 4 、结果： 形成两种末端 一、 “分子手术刀” —— 限制性核酸内切酶 粘性末端 平末端 专一性 大肠杆菌 (E.coli) 的一种限制酶 能识别 GAATTC 序列 ，并在 G 和 A 之间切开。 限制酶 什么叫黏性末端？ 限制 酶 ? 什么叫黏性末端？ ? 什么叫黏性末端？ 被限制酶切开的 DNA 两条单链的切口， 带有几个 伸出的核苷酸 ，他们之间正好 互 补配对 ，这样的切口叫 黏性末端 。 什么叫平末端？ 当限制酶从识别序列的中心轴线处 切开时，切开的 DNA 两条单链的切口，是 平整的，这样的切口叫 平末端 。 ? 要想获得某个目的基因必须要用限制酶切几个 切口？可产生几个黏性末端？一个目的基因有 几个黏性末端？ 要切两个切口，产生四个黏性末端，两个。 ? 如果把两种来源不同的 DNA 用同一种限制酶 来切割，会怎样呢？ 会产生相同的黏性末端。 二、 “分子缝合针” —— DNA 连接酶 1 、种类： 2 、作用部位： 两类 E · coli DNA 连接酶 T4 DNA 连接酶 磷酸二酯键 DNA 连接酶 可把黏性末端 之间的缝隙 “ 缝合 ”起来，即把梯子两边扶手的断口连 接起来，这样一个重组的 DNA 分子就形成了。 问题 3 ： DNA 连接酶与 DNA 聚合酶是一回事吗？ 为什么？ 答：不是一回事。基因工程中所用的连接酶有两 种：一种是从大肠杆菌中分离得到的，称之为 E· coli 连接酶。另一种是从 T4 噬菌体中分离得到， 称为 T4 连接酶。这两种连接酶催化反应基本相同， 都是连接双链 DNA 的缺口（ nick ），而不能连接 单链 DNA 。 DNA 连接酶和 DNA 聚合酶都是形成磷 酸二酯键，那么，二者的差别主要表现在什么地 方呢？ ? （ 1 ） DNA 聚合酶只能将单个核苷酸加到已 有的核酸片段的末端上，形成磷酸二酯键； 而 DNA 连接酶是在两个 DNA 片段之间形成磷 酸二酯键，不是在单个核苷酸与 DNA 片段之 间形成磷酸二酯键。 ? （ 2 ） DNA 聚合酶是以一条 DNA 链为模板， 将单个核苷酸通过磷酸二酯键形成一条与模 板链互补的 DNA 链；而 DNA 连接酶是将 DNA 双链上的两个缺口同时连接起来。因此 DNA 连接酶不需要模板。 ? 外源基因 ( 如抗虫基因 ) 怎样才能导入受体细 胞 ( 如棉花细胞 ) ？ “ 分子运输车” —— 载体。 ? 载体的作用有哪些？ 作用一：将目的基因转移到受体细胞中去。 作用二：目的基因随载体的复制而复制。 三、 “分子运输车” — 基因进入受体细胞的载体： 常用的载体主要有两类： 1 ）质粒 2 ）噬菌体或某些动植物病毒 原理：病毒，细菌等的侵