详细版第六章原核生物基因表达调控.ppt

2、mRNA的二级结构对翻译起始的调控 SD sequence AUG ~10bases UAAGGAGGU:complementary with 16s rRNA 5’ 精选 精选 精选 精选 实验证据 RNA引物由dnaG基因编码的引物酶催化合成 dnaG、rpoD及rpsU属于大肠杆菌基因组上的同一个操纵子 基因转录出来的三个蛋白相应的mRNA拷贝数大体相同，由于翻译的调控使得蛋白的拷贝数发生了很大的变化。 二、稀有密码子对翻译的影响 精选 精选 由于细胞内对应于稀有密码子的tRNA较少，高频率使用这些密码子的基因翻译过程容易受阻，影响了蛋白质合成的总量。 精选 三、重叠基因对翻译的影响 A基因 B基因 A基因终止密码子与B基因的起始密码子重叠 精选 重叠的密码保证了同一核糖体对两个连续基因进行翻译的机制。 偶联翻译是保证两个基因产物在数量上相等的重要手段。 重叠基因对翻译的影响 精选 trp操纵子trpE基因与trpD基因的翻译偶联机制 trpE－苏氨酸－苯丙氨酸－终止 ACU------UUC------UGA-----UGG----CU AUG----GCU 甲硫氨酸－丙氨酸－trpD 精选 五、翻译的阻遏 精选 六、魔斑核苷酸水平对翻译的影响 空载氨酰-tRNA对蛋白质和RNA的合成速度进行调控 精选 精选 （一）严紧控制和松散控制 1、严紧控制（基因型rel＋） 当细菌处于饥饿条件下，缺乏维持蛋白质合成的氨基酸，其大部分活性区域将被关闭，此称之为严紧控制。 严紧控制导致两种特殊的核苷酸积累：PPGpp、pppGpp 精选 cAMP 条件恢复，Spot基因催化ppGpp迅速降解 精选 2、松弛控制（基因型rel-） 松弛突变株（基因型rel- ）去除了严禁控制反应； 蛋白质合成停止，但RNA的合成速度没有下降； 氨基酸的匮乏不会导致（p）ppGpp的合成； 若有严紧因子存在，也能合成（p）ppGpp. 精选 （二）调控机制 应急信号： 鸟苷四磷酸（ppGpp）、 鸟苷五磷酸（pppGpp） 诱导物：空载tRNA 精选 精选 Catabolite gene activation protein site -10 site -35 site CACCCCAGGCTTTACACTTTATGCTTCCGGCTCGTATGTTGTGTGGAATTGAGCGGA TAACAATTTCACAC CTCATTAGG ACTCGATTGAGTGTAATTA 5’ 3’ Operon region 20bp RNA polymerase binding region or promoter region Primary structure of lac operon regulation region 5’ TATAAT 3’ Pribnow box 精选 CRP结合位点 cAMP-CRP复合物与启动子区的结合lac mRNA合成起始所必需的，有利于形成稳定的开放型启动子-RNA聚合酶结构。 精选 精选 四、lac操纵子DNA的调控区域－P、O区 控制区 信息区 -82～+1 -7～+28 精选 五、lac操纵子中的其他问题 （一）A基因及其生理功能 β-半乳糖苷酶 透过酶 乙酰基转移酶 乙酰化的半乳糖苷降低对细胞的危害 精选 （二）lac基因产物数量上的比较 Z、Y、A三个基因产物的拷贝数比例为1：0.5：0.2 精选 1、Lac mRNA可能在翻译过程中的核糖体相脱离，从而终止蛋白质链的翻译。 原因：在翻译水平上的调节 精选 2、Lac mRNA分子内部，A基因比Z基因更易受内切酶作用发生降解，故Z基因的完整拷贝数要比A基因多。 原因：在翻译水平上的调节 降解 精选 （三）操纵子的融合与基因工程 操纵子的融合： 由较弱启动子和强启动子的基因形成的融合基因，可以通过强启动子使弱启动子的转录增强，增加蛋白表达量。 精选 第三节 色氨酸操纵子与负控阻遏系统 精选 可诱导调节：调节分解代谢的操纵子，同时受cAMP-CAP的活性调节 可阻遏调节：调节合成代谢的操纵子 特殊代谢物调节基因活性的类型 精选 精选 精选 精选 一、 trp操纵子的阻遏系统 （一） trp操纵子的研究背景 酶合成阻遏的现象—Jacob and Monod的工作 精选 （二） trp操纵子的结构 阻遏型操纵子 trpA trpB trpC trpE trpD Ptrp Otrp 前导序列 a Trp 阻抑物 色氨酸 激活 RNA trpE trpD trpC trpB trpA 色氨酸合成所需的酶 trpR 精选 酶阻遏的操纵子模型 辅阻遏蛋白无活性