免疫学--沉淀反应.pptVIP

(二) 免疫固定电泳（immunofixation electrophoresis） 区带电泳与免疫沉淀反应相结合的免疫分析技术。 （一）原理 似免疫电泳，不同之处是电泳后直接将抗体作用于被分离的各组分蛋白质，抗Ag-Ab发生反应，使Ag在电泳位置上被免疫固定。 2. 技术要点 电泳 先将抗原作区带电泳，分离成不同区带 沉淀反应 电泳后，将Ab加于蛋白质区带表面， Ag与Ab发生沉淀反应，形成的CIC嵌于固相支持物中。 洗去游离的Ag或Ab，显示出被结合固定的某种蛋白质。 3.方法评价 简便、快速 灵敏度高于免疫电泳 4. 临床应用 可用于鉴定具有近似迁移率的多种蛋白 如各种M蛋白、补体的裂解产物、免疫球蛋白的轻链型别； 脑脊液、尿液或其他体液中微量蛋白的检测与鉴定。 第三节 免疫浊度分析技术（immunoturbidimetry） 免疫浊度测定 是将液相内的沉淀试验与现代光学仪器和自动分析技术相结合的一项分析技术。 当可溶性抗原与相应的抗体特异结合，可以形成不溶性的CIC，使反应液出现浊度。用仪器检测浊度，推算出复合物的量。 （二）技术要点 琼脂倾注制板。 待琼脂凝固后，在琼脂胶板上打孔。 在相对的孔中分别加入抗原或抗体。 置室温或37℃18～24h观察沉淀线 。 （三）方法评价 方法稳定、简便的方法，不需特别仪器设备，重复性好，但灵敏度稍差(1.25mg/L)。 （四）临床应用 1．血清学诊断:出现沉淀线，表明存在相应的Ag或Ab. 2. 免疫化学分析:浓度、分子量、纯度、反应性 沉淀线靠近抗原孔，提示抗体含量高；反之则反 出现多条沉淀线，则说明抗原和抗体皆不是单一成分。可用于鉴定抗原或抗体的纯度。 在琼脂内扩散的速度受分子量的影响。 如分子量大时，沉淀线弯向分子量大的一边。 如二者分子量相等，则形成直线。 用于抗原性质的分析 分析两种受检抗原的性质是 完全相同、 部分相同或 完全不同。 3．用于抗体效价的滴定 固定抗原的浓度，稀释抗体，经过自由扩散，形成沉淀线，出现沉淀线的最高抗体稀释度为该抗体的效价。 二、定向免疫扩散 在电场作用下，抗原抗体在介质中发生定向移动的沉淀反应。 定向、加速扩散 分类 火箭免疫电泳 (rocket immunoelectrophoresis) 对流免疫电泳 (counter immunoelectrophoresis) (一)对流免疫电泳 对流免疫电泳 是双向免疫扩散与电泳相结合，在电场中加速定向扩散的双向免疫扩散技术。 1. 基本原理 在pH8.6的琼脂凝胶中， 大部分蛋白质抗原在碱性溶液中带负电荷，且分子较小，电泳时，泳向正极。 抗体带弱负电荷，但分子量大，电泳力小于电渗力，泳向负极。 抗原和抗体相遇，比例合适时形成肉眼可见的沉淀线。 2.技术要点 制板，在琼脂板上成对打孔，加抗原和抗体。 电泳后观察结果。 3.方法评价 操作简便。 灵敏度较高，比双扩高约10倍。 分辨率低于双扩。 4. 临床应用 常用于抗原或抗体的定性分析、效价测定和纯度鉴定等 (二) 火箭免疫电泳 火箭免疫电泳 是将单向免疫扩散和电泳相结合，在电场中加速定向扩散的单向免疫扩散技术，由于其沉淀形似火箭，故称为火箭电泳。 1. 基本原理 电泳与反应 抗原在电场作用下，在含有适量抗体的凝胶中向正极泳动，逐渐形成梯度浓度，在抗原抗体比例适当时形成沉淀，随着抗原量的减少，沉淀带越来越窄，形成火箭峰样沉淀带，峰形高低与抗原量呈正相关。 结果分析 用已知量标准抗原作对照，绘制标准曲线，根据检测样品沉淀峰的高度可算出待测抗原的含量。 2. 技术要点 制板与打孔： 结果：电泳完毕，观察琼脂板上沉淀峰，测量(从孔 中心到峰尖的高度)。 计算: 以峰高为纵坐标，抗原浓度为横坐标(对数 坐标)，绘制标准曲线，求出待检样品抗原浓度。 电泳：样品孔侧置负极电泳。 3.方法评价 操作简便 灵敏度较高（mg/L） 4. 临床应用 1. 抗原蛋白定量，如IgA、IgG、IgM和sIgA检测。 2. C3、C4及其裂解产物检测。 3. AFP等检测 已被免疫浊度分析取代。 三、定向自由扩散 是将区带电泳与免疫扩散相结合的免疫化学分析技术。 （一） 免疫电泳（immunoelec