生化与分子生物学实验指导(1).pdf

实验一 氨基酸纸层析法 一、实验目的 通过氨基酸的分离，了解层析法的基本原理和操作方法。 二、实验原理 纸层析法（ paper chromatography ）是生物化学上分离、鉴定氨基酸混合物的常用技术，可 用于蛋白质的氨基酸成分的定性鉴定和定量测定。纸层析法又称纸色谱法，是用滤纸为支持物，所 用展层溶剂大多由水和有机溶剂组成，滤纸纤维与水的亲和力强，与有机溶剂的亲和力弱，因此在 展层时，纸纤维上吸附的水分是固定相，有机溶剂是流动相。溶剂由下向上移动的，称上行法；由 上向下移动的，称下行法。将样品点在滤纸上 (此点称为原点 ) ，进行展层，样品中的各种氨基酸在 两相溶剂中不断进行分配。由于它们的分配系数不同，不同氨基酸随流动相移动的速率就不同，于 是就将这些氨基酸分离开来，形成距原点距离不等的层析点。 溶质在滤纸上的移动速率用 Rf 值表示： 原点到层析斑点中心的距离 Rf = 原点到溶剂前沿的距离 在一定条件下某种物质的 Rf 值是常数。 Rf 值的大小与物质的结构、性质、溶