生物化学实验参考答案.pdf

《生物化学实验Ⅰ》总复习思考题 部分是自己做的，部分是百度的，各位看官如果要借鉴请酌情考虑，后果自负。 ——江湖游子 1. 请掌握下列生物化学实验常用仪器的正确操作使用方法，并能回答以下问题： （1）离心机使用时为什么要平衡？普通离心机与高速离心机在平衡时有什么不同要求？ 平衡是为了让转动物体重心正好在转轴上，如果不在，会对转轴产生很大作用力，有时整台机器会跟着晃 动。这对机器损耗很大。转速越高的离心机不光重量很重，使用时还要特别放平衡，就连离心管里面的试 液都要放置等量，离心管还要对称放入转子试管孔内，以确保转子平衡运行，而且在调节转速时，还要使 用分段升速法。 (2) 为什么用高速组织捣碎机进行动、植物组织捣碎时，需采用间歇式方式进行操作？ 为了防止产热过高，破坏组织内的蛋白质。防止蛋白变性。 (3) 用真空泵进行减压抽滤时，为什么要连接缓冲瓶？ 防止负压产生，引起水泵里的水或油泵里的油倒吸，进入滤瓶中，污染滤液。 2. 为什么肝糖元只能从刚宰杀的动物肝脏中获取？在提取肝糖元过程中，三氯乙酸、 95% 乙醇各起什么作 用？糖元水解产物中如果存在提取中残留蛋白质时，在用班氏试剂检测水解产物，有什么影响！ 动物死亡后，体内的细胞还能存活一段时间，由于进行细胞呼吸作用，肝细胞会消耗肝糖元，所以必须用 新鲜的肝脏细胞。三氯乙酸是固定作用（蛋白质能被三氯乙酸沉淀） ；乙醇：糖元不溶于乙醇，可以提取 糖元。班氏试剂使用时需要加热，而加热会时残留的蛋白质变性水解，对最终测得的水解产物颜色可能有 影响。 （水解的产生的氨气结合铜离子，是铜离子的氧化性失去，导致生产绛蓝色沉淀，实验将失败） 3. 请阐述分光光度仪的主要部件及其功能；阐述紫外与可见光的光波长范围；在紫外与可见光范围内测定 物质吸光度时，对光源与吸收池有何要求？光电管的功能是什么？为什么说光电管是分光光度仪最脆弱和 最易损的部件？ 光源（钨灯） ：发光。 单色器：把混合光波分解为单一波长光的装置。 吸收池：盛放待测流体（液体、气体）试样的容器。该容器应具有两面互相平行、透光且有精确厚度的平 面。它藉助机械操作能把待测试样间断或连续地送到光路中，以便吸收测量的辐射（光）通量。 检测器：将单色器分出的光信号进行光电转换，电信号在工作站显示成出峰。 测量装置：通过测得的电流表·记录器·数字示值读书单元的数据来绘制吸收曲线。 紫外光： 200至 350nm 可见光波长 :350至 760nm 紫外测定：其应用波长范围为 200～400nm 的紫外光做光源，在低于 350nm 的紫外光区工作时，必须采用 石英池或熔凝石英池。 可见光测定：用波长为 400 ～850nm 的可见光作光源，可以用玻璃池·石英池·熔凝池。 光电管的功能：光电转换，将光信号转化成电信号。 光电管容易产生光电管疲劳： 所以不测定时必须将试样室盖盖好， 使光路切断， 以延长光电管的使用寿命。 1 4. 请阐述 Beer-Lamber 定律，并用该定律阐述分光光度仪工作原理？用分光光度仪定制某物质标准曲线时， 需将 OD 值测定范围确定在 0.2～0.8区域内，为什么？（这题没找到答案，自己写的） 朗伯 (Lambert) 定律阐述为：光被透明介质吸收的比例与入射光的强度无关；在光程上每等厚层介质吸收相 同比例值的光。 比尔 (Beer)定律阐述为：光被吸收的量正比于光程中产生光吸收的分子数目。 log( Io/I)= εCl (1 —4) 式中 Io 和 I 分别为入射光及通过样品后的透射光强度； log （Io/I ）称为吸光度 (ab— sorbance)旧称光密度 (optical density) ；C 为样品浓度； l 为光程； ε为光被吸收的比例系数。当浓度采用摩尔浓度时， ε为摩尔吸 收系数。它与吸收物质的性质及入射光的波长 λ有关。 工作原理：通过测得的吸光度，带入 Beer-Lamber 定律，可以求得该物质的浓度；通过确定该物质的最大 吸收波长，可