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实验六 PCR 产物的琼脂糖凝胶电泳检测 常祖明 实验目的 ? 1. 掌握琼脂糖凝胶电泳的原理 ? 2. 学会琼脂糖凝胶的制作和进行电泳的方法 实验原理 1.DNA 琼脂糖凝胶电泳的原理 琼脂糖是一种线性多糖聚合物，天然聚合长链状分子， 在沸水中溶解， 45 ℃开始形成多孔性刚性滤孔，凝胶孔径 的大小取决于琼脂糖的浓度，浓度越高，孔隙越小，其分 辨能力就越强。 DNA 分子在琼脂糖凝胶中泳动时有电荷效 应和分子筛效应。 实验原理 （ 1 ）电荷效应 DNA 分子在 PH 值高于其等电点的溶液中带负电荷，在 电泳时向阳极移动。 （ 2 ）分子筛效益 在一定的电场强度下， DNA 分子的迁移速度主要取决 于分子筛效益，即 DNA 分子本身的大小和构象（共价闭环 DNA 线状 DNA 开环 DNA ），而且其迁移速度与其相对分子 质量的对数值成反比，所以不用相对分子质量的 DNA 分子可 以在琼脂糖凝胶电泳中分离。 2. DNA 分子进行染色的原理（以溴化乙锭为例） 观察琼脂糖凝胶中 DNA 最常用的方法是利用荧光染料溴化乙锭进行染色。 溴化乙锭是一种高度灵敏的荧光染色剂，用于观察琼脂糖凝胶中的 DNA 分 子。溴化乙锭在紫外光照射下能发射荧光，当 DNA 样品在琼脂糖凝胶中从 负极向正极泳动时，溴化乙锭从正极向负极移动，这样溴化乙锭分子就会嵌 入到 DNA 分子中的碱基对之间形成络合物，这种络合物在紫外光下发射的 荧光要比单纯的 DNA 分子要强的多，便于 DNA 的检测。 实验仪器、材料、试剂 ? 实验仪器及用具 电泳仪、移液枪、电磁炉、锥形瓶、容量瓶、 紫外分析仪 ? 实验材料及试剂 实验材料：鸡血 DNAPCR 扩增产物 DNA Marker 、 GoldView 核酸染色剂 、琼脂糖、三羟甲基 氨基甲烷（ Tris ） 、硼酸 、乙二胺四乙酸二钠、 6 × DNA LodingBuffer 实验试剂： 0.5 × TBE （ PH8.0 ）缓冲液 、 1.0% 琼脂糖溶液、 琼脂糖凝胶的配制 1g 琼脂糖 实验步骤 5μ l GoldView 100mlTBE 缓冲液 冷却到 60 ℃ 点样 1. 将适量的 DNA Marker 用移液枪加入凝胶的第一个孔中。 2. 在 PCR 产物中加入 6 × DNA LodingBuffer （每 5ul 产物加 入 1ul ），混匀后，用移液枪加入到样品孔内，每孔加 2ul 。