生物素亲与素标记技术完整讲解剖析.ppt

生物素-亲和素标记技术 第一组  背景 二原理 三实验方法及步骤 四应用 五反应特点 六应用前景  背景 生物素 又称维生素H、辅酶R,是水溶性维生素,也属于维生素B族 1936年,两位德国科学家Kog和 Tonnis从煮熟的鸭蛋黄中 分离提取出一种结晶物质,是酵母生长所必需的,称之为 生物素”。生物素厂泛存在于自然界的各种生物中,是人类 和动物维持健康不可缺少的要素,并因而得名。因其在食物 中的分布很广,几乎每种食物中都含有少量的生物素,加之 人体每日的所需量又很少,所以,人们◆般都不缺乏这种维生 素  亲和素: 亲和素是一种糖蛋白,可由蛋清中提取。分子量60kD, 每个分子由4个亚基组成,可以和4个生物素分子亲密结合 亲和素与生物素的结合,虽不属免疫反应,但特异性强,亲和力大 结合位置,可以连接更多的生物素化的分子,形成一种类似晶格的复合体 因此把亲和素和生物素与ELsA偶联起来,就可大大提高ELsA的敏感度 卵白亲合素 亲合素键亲合素 卵黄亲合素 类亲合素等 后两种因其特异性亲合力低,研究不多,前两种目前已深入研究并得到厂泛应用。  二原理 20世纪60年代初发现了生物素 biotin,B)和卵白素( avidin,A), 其亲和力至少比抗原-抗体结合力高百万倍,是目前发现的自然界中 具有最强亲和力的物质 每个分子由4个亚基组成,可以和4个生物素分子亲密结合。 和系与生物素都可与蛋臼质(包括抗原、抗体、醇等)、荧光系等分子结合而不影响 活性,是理想的标记剂 体分子可偶联数十个生物素或亲和素分子,而亲和素或 物素标记法 Labeled avidin biotin,LAB)、亲和素生物素桥法 bridged avidin bioti 和小会素系统(6 in-avidin system,BA)是70年代后期应用于兔疫学,并得到迅速发 高。BAS已经广泛应用于生物医学实验硏究的各个领域,既可用于微量抗原、抗体及受体的定量 定性检测及定位观察研究,亦可制成亲和介质用于上述各类反应体系中反应物的分离、纯化