生物化学简明教程(第四版)课后习地的题目.pdfVIP

实用标准文档 2 蛋白质化学 1．用于测定蛋白质多肽链 N 端、 C 端的常用方法有哪些？基本原理是什么？ 解答 ：（1） N- 末端测定法： 常采用 2, 4 ―二硝基氟苯法、 Edman 降解法、 丹磺酰氯法。 ① 2, 4 ―二硝基氟苯(DNFB 或 FDNB) 法：多肽或蛋白质的游离末端氨基与 2, 4 ―二硝基 氟苯（ 2, 4 ―DNFB ）反应（ Sanger 反应），生成 DNP ―多肽或 DNP ―蛋白质。由于 DNFB 与氨基形成的键对酸水解远比肽键稳定，因此 DNP ―多肽经酸水解后，只有 N ―末端氨基酸 为黄色 DNP ―氨基酸衍生物，其余的都是游离氨基酸。 ② 丹磺酰氯 (DNS) 法： 多肽或蛋白质的游离末端氨基与与丹磺酰氯 （DNS ―Cl ）反应生 成 DNS ―多肽或 DNS ―蛋白质。由于 DNS 与氨基形成的键对酸水解远比肽键稳定，因此 DNS ―多肽经酸水解后， 只有 N ―末端氨基酸为强烈的荧光物质 DNS ―氨基酸，其余的都是游 离氨基酸。 ③ 苯异硫氰酸脂（ PITC 或 Edman 降解）法：多肽或蛋白质的游离末端氨基与异硫氰 酸苯酯（ PITC ）反应（ Edman 反应），生成苯氨基硫甲酰多肽或蛋白质。在酸性有机溶剂 中加热时， N ―末端的PTC―氨基酸发生环化，生成苯乙内酰硫脲的衍生物并从肽链上掉下来， 除去 N ―末端氨基酸后剩下的肽链仍然是完整的。 ④ 氨肽酶法： 氨肽酶是一类肽链外切酶或叫外肽酶， 能从多肽链的 N 端逐个地向里切。 根据不同的反应时间测出酶水解释放的氨基酸种类和数量， 按反应时间和残基释放量作动力 学曲线，就能知道该蛋白质的 N 端残基序列。 （2 ）C―末端测定法：常采用肼解法、还原法、羧肽酶法。 肼解法：蛋白质或多肽与无水肼加热发生肼解，反应中除 C 端氨基酸以游离形式存 在外，其他氨基酸都转变为相应的氨基酸酰肼化物。 ② 还原法：肽链 C 端氨基酸可用硼氢化锂还原成相应的α―氨基醇。肽链完全水解后， 代表原来 C ―末端氨基酸的α―氨基醇，可用层析法加以鉴别。 ③ 羧肽酶法： 是一类肽链外切酶， 专一的从肽链的 C ―末端开始逐个降解， 释放出游离 的氨基酸。 被释放的氨基酸数目与种类随反应时间的而变化。 根据释放的氨基酸量 （摩尔数） 与反应时间的关系，便可以知道该肽链的 C ―末端氨基酸序列。 2 ．测得一种血红蛋白含铁 0.426% ，计算其最低相对分子质量。一种纯酶按质量计算 含亮氨酸 1.65% 和异亮氨酸 2.48% ，问其最低相对分子质量是多少？ 解答 ： （1）血红蛋白： 精彩文案 实用标准文档 3 ．指出下面 pH 条件下，各蛋白质在电场中向哪个方向移动，即正极，负极，还是保 持原点？ （1）胃蛋白酶（ pI 1.0 ），在 pH 5.0 ；（2 ）血清清蛋白（ pI 4.9 ），在 pH 6.0 ； （3 ）α- 脂蛋白（ pI 5.8 ），在 pH 5.0 和 pH 9.0 ； 解答 ：（1 ）胃蛋白酶 pI 1.0 ＜环境 pH 5.0 ，带负电荷，向正极移动； （2 ）血清清蛋白 pI 4.9 ＜环境 pH 6.0 ，带负电荷，向正极移动； （3 ）α- 脂蛋白 pI 5.8 ＞环境 pH 5.0 ，带正电荷，向负极移动； α- 脂蛋白 pI 5.8 ＜环境 pH 9.0 ，带负电荷，向正极移动。