分子生物学第六章基因的表达与调控上 (2)3教学案例.ppt

所以，需要一个不依赖于cAMP-CRP的启动子(S2)进行本底水平的组成型合成，以及一个依赖于cAMP-CRP的启动子(S1)对高水平合成进行调节。 这就是说，只有在S2活性完全被cAMP-CRP抑制时，调控作用才是有效的。 6．3．2．4 转录弱化作用 转录的弱化理论认为:mRNA转录的终止是通过前导肽基因的翻译来调节的。 因为在前导肽基因中有两个相邻的色氨酸密码子，所以这个前导肽的翻译必定对tRNATrp的浓度敏感。 当培养基中色氨酸的浓度很低时，负载有色氨酸的tRNAtrp也就少，这样翻译通过两个相邻色氨酸密码子的速度就会很慢，当4区被转录完成时，核糖体才进行到1区(或停留在两个相邻的Trp密码子处)，这时的前导区结构是2-3配对，不形成3-4配对的终止结构，所以转录可继续进行，直到将trp操纵子中的结构基因全部转录。 The trp Attenuator: 3、弱化机制 而当培养基中色氨酸浓度高时，核糖体可顺利通过两个相邻的色氨酸密码子，在4区被转录之前，核糖体就到达2区，这样使2-3不能配对，3-4区可以自由配对形成茎-环状终止子结构，转录停止，trp操纵子中的结构基因被关闭而不再合成色氨酸。 所以，弱化子对RNA聚合酶的影响依赖于前导肽翻译中核糖体所处的位置。 已从大肠杆菌和沙门氏菌中陆续发现了不少具有弱化作用的操纵子，它们都具有前导肽，并且前导肽中都富含该操纵子所合成的那种氨基酸。 6．3．3 trp操纵子弱化机制的实验依据 在含有较高浓度色氨酸的培养基中，色氨酰-tRNA合成酶缺陷型大肠杆菌中trp操纵子结构基因的表达却并没有完全受到抑制。 进一步研究温度敏感突变株trpS5证实，它所编码的Trp-tRNA合成酶只在30℃时有活性，能使色氨酸活化生成tRNAtrp，在42℃时该酶没有活性。 比较野生型和突变型在42℃和30℃条件下有色氨酸供应时邻氨基苯甲酸合酶(TrpE)的活性发现: 30℃时，色氨酰-tRNA合成酶有活性，可生成tRNATrp，trp操纵子结构基因的表达受抑制； 在42℃时，色氨酰-tRNA合成酶失去活性，不能生成tRNATrp，trp结构基因表达受抑制的程度就不明显。 野生型大肠杆菌色氨酰-tRNA合成酶不受温度控制，所以trp基因表达基本不受温度影响。 研究另一个前导区及D基因缺失的trp操纵子突变体(ΔtrpLD102)还发现，该细菌在补充了过量色氨酸的培养基中有高于野生型亲本株系8-10倍的色氨酸合成酶活性，这种去阻遏作用不论在trpR+或trpR-菌株中都存在。 ΔtrpED53的L区中不缺失弱化子，而trpLD102L区中缺失弱化子。缺失前导区后的表达比有前导区的表达要高得多，充分说明trp操纵子的表达调控除阻遏作用外，还受到前导区的影响，失去了这个因素就失去了一个调控机制。 trpL29是增强终止的突变型，它的前导序列第29位核苷酸由原来的G变为A，AUG… AUA,AUG是前导肽的起始密码，变为AUA后便不能起始蛋白质合成，有利于trp mRNA形成1－2、3－4稳定的二级结构，从而增强终止。 这一突变型的邻氨基苯甲酸合成酶活性很低，并且对色氨酸不敏感。因为前导肽根本不能翻译下去，即使在色氨酸饥饿条件下仍然不能作出解除终止的反应。 另一个增强终止的突变型是trpL75，其75位上的G变成了A。野生型75位上的G在2区内，它可以与3区内118位上的C形成氢键，当G变为A后，减弱了2区和3区形成茎-环结构的能力，导致终止增强，trpL75对色氨酸饥饿不能作出反应。 此外，缺失了3‘端4个U的突变株AtrpLC1419，也导致终止解除，说明3’端U对转录终止起作用。 细菌中为什么需要有弱化子系统？ 一般认为: 阻遏物从有活性向无活性的转变速度较慢，需要有一个能更快地做出反应的系统，以保持培养基中适当的色氨酸水平。 弱化子能较快地通过抗终止的方法来增加trp基因表达，迅速提高内源色氨酸浓度。 为什么还要有阻遏体系呢? 没有阻遏体系，似乎只有弱化也可以调节色氨酸酶系的合成。 目前认为阻遏物的作用是在有大量外源色氨酸存在时，阻止非必需的先导mRNA的合成，它使这个合成系统更加经济。 事实上，自然界中存在着不同类型的合成体系。组氨酸操纵子拥有在功能上与trp操纵子完全相同的弱化子结构，但没有阻遏物，它的表达完全受弱化子调节。 细菌通过弱化作用弥补阻遏作用的不足，因为阻遏作用只能使转录不起始，对于已