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题
重组DNA导入宿主
胞与鸫化子的筛选?
第一节重组DNA向宿主细胞的导入
第二节转化子的筛选与鉴定
第三节目的基因序列测定
第一节重组DNA向宿主细
胞的导入
一、转化
通过接合作用传递质粒DNA
通过转染/转导作用传递遗传物质
转化:以质粒作为克隆载体将目的基因导
入宿主细胞
1928年,美国的 Oswald, Avery首次开展了肺炎球菌的转
化试验
感受态细菌是指细菌处于容易接受外源DNA的
状态。有的细菌在生长周期任何时候自动产生如枯草
嗜血杆菌。有的在对数生长期发生,如 E coli。产生机
不明。一是原生质体假说,另一是酶受体假说
转化作用就是一种基因型细胞(感受态细菌)从
周围介质中吸收来自另一种基因型细胞的DNA,进而
使原来细胞的遗传基因和遗传性发生相应变化的现象
常见转化方法有()原生质体转化法;白化学转化法;(电
()原生质体转化法:除去细胞壁后加外源DNA,经
吸收恢复再生培养,如枯草杆菌。
化学转化法:1970年 Mandel和Higa首先用CaCl2
短暂的热休克后,可使外源DNA转入E.coli
1.原理:将对数生长期的细菌在0℃下,用预冷的
CaCl2溶液低渗处理,以使菌体的细胞壁和细胞膜
通透性增加,菌体膨胀成球形。DNA易于进入细
菌的细胞内
用冷CaC1,低渗处理E,coli使菌体成球形
外源DNA可形成抗 DNase的羟基-钙磷酸复合物而
被吸附,经短暂42℃热休克,易于进入胞内而不
被降解,转化效率达105-10,它与菌株(hsdR)
2方法
(1)感受态细菌的制备(2)转化
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