实验中常用蛋白检测的方法.pptVIP

蛋白的检测方法  Western blot 免疫组化 规R一一一一18k 20 ed d www wo wa wa ww e45kD PIDD 免疫荧光 ELISA  Western blot 原理:经过PAGE分离的蛋白质样品,转移到 n点n W抗 DF膜上(以非共价键形式吸附蛋白质,且 能保持电泳分离的多肽类型及其生物学活性 不变)。以固相载体上的蛋白质或多肽作为 抗原,与对应的抗体起免疫反应,再与酶或 育底物(知为后色法,则应育至早色可 同位素标记的第二抗体起反应,经过底物显 胶片墨器 色、化学发光或放射自显影以检测电泳分离 的特异性目的基因表达的蛋白成分。 特点:组织、细胞来源均可;半定量  免疫组化/免疫荧光 ·原理:抗原抗体反应,即抗原与抗体特异性结合的原理,通过化学反应 使标记抗体的显色剂(荧光素、酶、金属离子、同位素)显色来确定组 织细胞内抗原(多肽和蛋白质),对其进行定位、定性及定量的研究 ·特点:是融合了免疫学原理(抗原抗体特异性结合)和组织学技术(组 织的取材、固定、包埋、切片、脱蜡、水化等),通过化学反应使标记 抗体的显色剂(荧光素、酶、金属离子、同位素)显色,来对组织(细胞) 内抗原进行定位、定性及定量的研究(主要是定位)。样本是细胞或组织, 要在显微镜下观察结果,可能出现膜阳性、质阳性和核阳