实验四感受态细胞制备转化及转化子筛选.pptVIP

实验四:感受态细胞的制备、转化 及转化子的筛选 实验目的 了解CaCl2制备感受态细胞的原理,掌握制备的方 法;掌握大肠杄菌热转化的方法;掌握转化子的 筛选原理及步骤 二、实验材料与仪器 实验材料: 大肠杄菌TG1菌株,含Amp抗性基因的 PEGFP载体  5 MCS 286 Bsr Gl4 Aat I (14%4 ACC ATG ATT ACG CCA AGC TG CAT GCC TGC AGG TCG ACT CTA GAG GAT CCC CGG GTA CCG FTC GCC ACC ATG GTG Age I Nco I GGCCGCGACTCTAGAATTCCAACTGAGCGDCGGTCGCTACCATTACCAACTTGTCTGETGTCAAAAATAATAGGCCT EcoH s A  实验试剂: ≯0. IM Cacl溶液,15%甘油的O. IM Cacl溶液, LB液体培养基,LB固体培养基,O.IM氨苄青霉 素 ≥冷冻离心机,水浴锅,超净工作台。 LB液体培养基: Tryptone Yeast extract Nacl 加去离子水1L,用NaOH调PH值至70,高温高压灭菌后 4℃保存。(如制作固体培养基,应加Agar15g/L)  三、实验步骤 CaCl2制备感受态细胞 1.从新活化的大