单克隆抗体的制备、纯化及鉴定.pdfVIP

单克隆抗体的制备、纯化及鉴定 一、实验目的： 单克隆抗体制备是细胞免疫学的一个重要里程碑，它涵盖了细胞培养、细胞融合、 免疫动物和抗体效价检测等各个方面内容。 二、实验原理： 骨髓瘤细胞在体外培养能大量无限增殖，但不能分泌特异性抗体；而抗原免 疫的 B 淋巴细胞能产生特异性抗体，但在体外不能无限增殖。将免疫脾细胞与 骨髓瘤细胞融合后形成的杂交瘤细胞，继承了两个亲代细胞的特性，既具有骨髓 瘤细胞能无限制增殖的特性，又具有免疫 B 细胞合成和分泌特异性抗体的能力。 经在 HAT 培养基[含有次黄嘌呤(H)、氨基喋呤(A)和胸腺嘧啶核苷(T)] 中进行选 择性培养，未融合的脾细胞因不能在体外长期存活而死亡；未融合的骨髓瘤细胞 合成 DNA 的主要途径被培养基中的氨基蝶呤阻断，又因缺乏次黄嘌呤-鸟嘌呤- 磷酸核糖转移酶（HGPRT ），不能利用培养基中的次黄嘌呤完成DNA 的合成过 程而死亡。只有融合的杂交瘤细胞由于从脾细胞获得了次黄嘌呤-鸟嘌呤-磷酸 核糖转移酶，因此能在 HAT 培养基中存活和增殖。经过克隆选择，可筛选出能 产生特异性单克隆抗体的杂交瘤细胞，在体内或体外培养，即可无限制地大量制 备单克隆抗体。 三、试剂与器材： 细胞培养板、解剖器械、平皿、酶标仪、加样器、细胞计数板、CO2 培养箱、