第二章沉淀讲解材料.pptVIP

初级分离 概念：指从菌体发酵液、细胞培养液、细胞破碎液及其他各种生物原料初步提取目标产物，使目标产物得到浓缩和初步分离的下游加工过程 特点：分离对象体积大、杂质含量高，初级分离技术应具有操作成本低、适于大规模生产的优势 方法：离心、过滤、沉淀、膜分离、萃取、吸附 第二章 沉 淀 定义：沉淀是物理环境的变化引起溶质溶解度降低、生成固体凝聚物的现象。具有浓缩与分离的双重作用。 与结晶联系：在本质上都是新相析出的过程，主要是物理变化。 区别：结晶为同类分子或离子以有规则排列形式析出；沉淀为不定形的固体颗粒，构成成分复杂，纯度低。 第一节 蛋白质表面性质 蛋白质表面由不均匀分布的荷电基团形成的荷电区、亲水区和疏水区构成。 蛋白质水溶液呈胶体性质 使蛋白质形成稳定的胶体溶液、防止蛋白质凝聚沉淀的因素： 蛋白质分子周围存在与蛋白质分子紧密或疏松结合的水化层 蛋白质分子间的静电排斥作用（双电层） 可通过降低蛋白质周围的水化层和双电层厚度降低蛋白质溶液的稳定性，实现蛋白质的沉淀。 蛋白质沉淀常采用恒温条件下添加各种不同试剂的方法。 第二节 各种沉淀方法 一、盐析沉淀（重点） 二、等电点沉淀（次重点） 三、有机溶剂沉淀（次重点） 四、热沉淀 一、盐析沉淀 水溶液中蛋白质的溶解度一般在生理离子强度范围内最大，而低于或高于此范围时溶解度均降低 向蛋白质的水溶液逐渐加入电解质，蛋白质吸附盐离子后，带电表层使蛋白质分子间相互排斥，蛋白质与水分子间相互作用加强，蛋白质溶解度增大的现象称为盐溶 蛋白质在高离子强度的溶液中溶解度降低、发生沉淀的现象称为盐析 （一）盐析沉淀的原理 蛋白质溶液的离子强度增大时，蛋白质表面的双电层厚度降低，静电排斥作用减弱。 盐离子的水化作用使蛋白质表面疏水区附近的水化层脱离蛋白质，暴露出疏水区域，增大了蛋白质表面疏水区之间的疏水相互作用，容易发生凝集，进而沉淀。 （二）影响盐析的因素 无机盐（浓度、种类） 温度和pH值 无机盐的种类 在相同的离子强度下，不同种类的盐对蛋白质的盐析效果不同。 离子半径小而带电荷较多的离子盐析效果较好。例如含高价阴离子的盐比一价盐的盐析效果好。 常见阴离子的盐析作用顺序为 PO43－SO42－CHCOO－Cl－NO3－I－ 阳离子的盐析作用顺序为 NH4＋K＋Na+Mg2+ 选择盐析的无机盐时，对盐的其他要求： 溶解度大，能配制高离子强度的盐溶液 溶解度受温度影响较小，便于在低温下进行盐析 盐溶液密度不高，以便蛋白质沉淀的沉降或离心分离 最常用的盐析盐——硫酸铵： 价格便宜、溶解度大且受温度影响很小、能稳定蛋白质（酶）。 温度和pH值 在离子强度较高的溶液中，升高温度蛋白质失水，蛋白质溶解度下降；在低离子强度溶液或纯水中，蛋白质的溶解度在一定温度范围内一般随温度升高而增大。 在pH值接近蛋白质等电点的溶液中，蛋白质的溶解度最小，有利于提高盐析效果。 蛋白质的盐析沉淀操作需选择合适的pH值和温度，使蛋白质的溶解度较小。同时盐析操作条件要温和，不能引起目标蛋白质的变性。盐析需在较低温度下进行。