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生物化学实验复习题： 1. 试述旋光法测定淀粉含量的实验原理。 在加热及稀盐酸的作用下，淀粉水解并转入盐酸溶液中。在一定的水解条件下，不同谷 物淀粉的比旋光度是不同的。其在 171～ 195 之间，因此可用旋光法测定粗淀粉的含量。 2. 淀粉含量测定的方法有几种？比较各方法特点。 淀粉是由多个葡萄糖缩合而成的多糖，测定淀粉的方法主要有酸水解法、酶水解法和旋 光法等。 1、酸水解法：面粉经乙醚除去脂肪，乙醇除去可溶性糖类后，用酸水解淀粉为葡萄糖， 按还原糖测定方法测定还原糖含量，再折算为淀粉含量。 2 、酶水解法：面粉经除去脂肪及可溶性糖类后，其中淀粉用淀粉酶水解成双糖，再用 盐酸将双糖水解成单糖，最后按还原糖测定，并折算成淀粉。 3 、旋光法：在加热及稀盐酸的作用下，淀粉水解并转入盐酸溶液中。在一定的水解条 件下，不同面粉淀粉的比旋光度是不同的。其淀粉的比旋光度在 171~195 之间，因此可 用旋光法测定淀粉的含量。 3. 简述旋光法测定淀粉的关键步骤。 1. 样品的处理 在电子天平上称取小麦粉 2.5000g 置于三角瓶中→ 加入 50ml 1%HCl 混成浆状（不能有 结块） →沸水浴中 准确加热 15min →先加 1ml 30% ZnSO4 混匀→再加 1ml 15%亚铁氰化 钾混匀→移至 100ml 容量瓶中加水定容混匀后过滤→弃去最初 15ml 收集其余滤液。 2. 旋光度测定 取滤液 20ml 置于旋光管中， 先用 1%HCl 调节旋光仪“ 0 ”点，然后将样品溶液放入旋 光仪中测α 4. 写出计算粗淀粉含量的公式并说明各符号的含义。 5. 试述凯氏定氮法测定蛋白质含量的实验原理。 含氮的有机物与浓硫酸共热时，其中的碳、氢二元素被氧化成二氧化碳和水，而氮 则转变成氨，并进一步与硫酸作用生成硫酸铵。 浓碱可使消化液中的硫酸铵分解， 游离出氨， 借水蒸汽将产生的氨蒸馏到 一定浓度的过量硼酸溶液中，硼酸吸收氨后使溶液中氢离子浓度降低，然后用标准 无机酸滴定，直到恢复溶液中原来氢离子浓度为止，最后根据所用标准酸的摩尔数 （相当于待测物中氨的摩尔数）计算出待测物中的总氮量。 6. 蛋白质含量测定的方法有几种？比较各方法特点。 定氮法 , 双缩尿法（ Biuret 法）、Folin －酚试剂法（ Lowry 法）和紫外吸收法 . 考马 斯亮蓝法（ Bradford 法） . 凯氏定氮 灵敏度低 , 适用于 0.1.0mg 氮, 误差为 ±2 ％ 费时 10 小时 将蛋白氮转化为氨 , 用酸吸收后滴定 非蛋白氮（可用三氯乙酸沉淀蛋白质 而分离） 用于标准蛋白质含量的准确测定；干扰少；费时太长 双缩脲法（ Biuret 法） 灵敏度低 20mg 中速 20~30 分钟 多肽键＋碱性 Cu2＋?紫 色络合物 硫酸铵； Tris 缓冲液；某些氨基酸 用于快速测定 , 但不太灵敏；不同蛋 白质显色相似 紫外吸收法 较为灵敏 50 ～ 100mg 快速 10 分钟 蛋白质中的酪氨酸和色氨酸残基 在 280nm处的光吸收 各种嘌吟和嘧啶； Folin －酚试剂法 （Lowry 法） 灵敏度高 5mg 慢速 40 ～60 分钟 双缩脲反应； 磷钼 酸－磷钨酸试剂被 Tyr 和 Phe 还原 硫酸铵； Tris 缓冲液；甘氨酸； 各种硫醇 耗费时间长；操作要严格计时；颜色深浅随不同蛋白质变化 考马斯亮蓝法 (Bradford 法 ) 灵敏度最高 5mg 快速 5～ 15 分钟 考马斯亮蓝染料与 蛋白质结合时 , 其 lmax 由 465nm变为 595nm 强碱性缓冲液；