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琼脂糖凝胶电泳法测定
乳酸脱氢酶同工酶
苏州大学附属第二医院检验科
王冰莹
实验目的
今掌握:电泳法测定血清乳酸脱氢酶同工酶的基本
原理
熟悉:电泳法分离血清乳酸脱氢酶同工酶的的操
作过程、注意事项及对疾病诊断的临床意义。
了解:琼脂糖凝胶电泳的临床应用
实验原理
乳酸脱氢酶同工酶的一级结构和等电点不同,
在一定的电泳条件下,使其在支持介质上分离。然
后利用酶的催化反应进行显色
L-乳酸+ NAL. LD PH8.89.8
→丙酮酸+NADH+H
nadh+h+2PMS- 2PMSH+ NaD
2PMSH+int-2PMS+INTH+H
试剂与器材
1.巴比妥缓冲液(pH86,离子强度0.075)
2.0.082mo/巴比妥-盐酸缓冲液(pH82)
3.10mmo/L乙二胺四乙酸二钠
4.5g/缓冲琼脂糖凝胶
8g/缓冲琼脂糖凝胶
6.显色试剂
7.固定漂洗液
操作步骤」
1.制备琼脂糖凝胶玻片
加样用微量加样器加约40μ血清于槽内
3.电泳电压75V~100V,电泳30min~40min
4.显色
5.固定和漂洗
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