核酸提取和注意事项.pptVIP

总RNA提取——通用方法 异硫氰酸胍/苯酚法（TRIzol法） 原理： 核酸在中性条件下，因磷酸基解离而带负电荷，这一部分由于水化而溶于水。而在酸性条件下，磷酸基的负电荷消失，水溶性下降。因此，在酸性酚的处理下，DNA向疏水性的酚层移动，而RNA由于有-OH的存在有亲水性，因此向水层移动。 TRIzol试剂 TRIzol试剂中的主要成分为异硫氰酸胍和苯酚，其中异硫氰酸胍可裂解细胞，促使核蛋白体的解离，使RNA与蛋白质分离，并将RNA释放到溶液中。当加入氯仿时，它可抽提酸性的苯酚，而酸性苯酚可促使RNA进入水相，离心后可形成水相层和有机层，这样RNA与仍留在有机相中的蛋白质和DNA便分离开。水相层主要为RNA，有机层主要为DNA和蛋白质。 总RNA提取——样本准备 植物/动物组织样本： 新鲜取材或组织离体后液氮速冻，存于液氮或-80℃。 为避免反复冻融，需小份分装（50~100 mg/份）。 细胞样本： 新鲜收集待用或加入TRIzol后 -80℃冻存细胞沉淀。 血液样本： 新鲜血液分离出淋巴细胞，待用或加入TRIzol后 -80℃ 冻存细胞沉淀。 真核细胞总RNA提取——实验步骤 收集细胞 离心洗涤 裂解变性 异丙醇沉淀 抽 提 RNA溶液 干燥溶解 293细胞样品为例 上层溶液 前言 核酸是遗传信息的载体，是最重要的生物信息分子，是分子生