细菌培养基的制备灭菌及接种培养技术课件.pptVIP

1 实 验 二 细菌培养基的配制、灭 菌及接种、培养技术 2 第一部分 细菌培养基的制备、灭菌 目的要求 实验材料 实验程序 3 目 的 要 求 熟悉玻璃器皿的洗涤和灭菌前的准备。 掌握培养基和无菌水的制备方法。 掌握高压蒸气灭菌技术。 4 实 验 材 料 药品：牛肉膏、蛋白胨、氯化钠、琼脂、蒸馏水等 。 高压蒸气灭菌锅、烘箱、细菌过滤器、酒精灯。 其它：培养皿、试管、移液管、锥形瓶、烧杯、玻 璃珠等。 5 实 验 程 序 玻璃器皿的洗涤和包装 培养基的制备 无菌稀释水的制备 培养基和玻璃器材等的灭菌 6 实验程序 1 （玻璃器皿的洗涤和包装） 清洗并烘干玻璃器皿：如培养皿、移液管、试管等。 棉塞的制作 包装培养皿和移液管等。 9 实 验 程 序 2 （培养基的配制方法和步骤） 1. 取一个 300mL 烧杯，装 150mL 蒸馏水。 2. 按配方逐一正确称取各种成分，依次加入水中溶解。 注意： a. 前一种成分溶解之后，才能加入下一种成分 b. 可加热促进各成分溶解 c. 加热过程应不断搅拌，以免糊底烧焦，并适当 补充因蒸发而损失的水量。 培养基配方 牛肉膏 蛋白胨 氯化钠 琼脂 蒸馏水 pH 数量 0.75g 1.5g 0.75g 3g 150mL 7.6 10 实 验 程 序 2 （培养基的配制方法和步骤） 3. 调 pH 值：用 10 ％ NaOH 调 pH 至 7.6 ，用精 密 pH 试纸对照。 4. 分装：将培养基分装于 5 支试管，其余全部 倒入 250mL 锥形瓶中，分别塞上棉塞。 注意 不要污染棉塞和瓶口 。 5. 包扎成捆，挂上标签，注明何种培养基。 6. 灭菌备用：培养基灭菌后必须在 37 ℃下恒 温培养 24h ，确定无菌生长，方可使用。 11 实 验 程 序 2 （培养基的分装和斜面培养基的制作） ☆每支试管装的量为试管高度的 1/4 ～ 1/3. ☆斜面长度为试管长度的 1/3 ～ 1/2. 12 实验程序 2 （培养基的配制方法和步骤） 13 实验程序 3 （无菌稀释水的制备） 取一个 250mL 的锥形瓶装 90( 或 99)mL 蒸馏水， 放 30 颗玻璃珠 ( 用于打破活性污泥、菌块或土壤 颗粒 ) 于锥形瓶内，塞棉塞、包扎，待灭菌。 另取 5 支 18mm × 180mm 的试管，分别装 9mL 蒸馏水，塞棉塞、包扎，待灭菌。 无菌稀释水为微生物分离实验中所需要的材料。 14 实验程序 4 （培养基和玻璃器材等的灭菌） 加热灭菌有 干热灭菌 和 湿热灭菌 。 干热灭菌法：电热烘箱作为干热灭菌器 干热灭菌的操作方法 a. 将待灭菌的物品放入恒温箱，将温度调节至 160 ℃ 并维持 2h ； b. 把恒温箱的调节旋钮调回零处，待温度降到 50 ℃ 左右，才能将物品取出。 15 实验程序 4 （培养基和玻璃器材等的灭菌） 湿热灭菌：高压蒸气灭菌法 高压蒸气灭菌法的操作步骤如下： 1. 灭菌锅内加入一定量的水。 2. 将待灭菌的物品放入锅内，并关严锅盖。 注意：器物不能装得太满。 3. 接通电源，进行加热。 4. 排除高压锅内的冷空气，可将排气阀打开，待温度 计指示温度为 100 ℃时关闭排气阀；或当排出的蒸气相 当猛烈且微带蓝色时关闭排气阀。 16 实验程序 4 （培养基和玻璃器材等的灭菌） 5. 当压力达 1.05kg/cm 2 ( 灭菌器内的温度为 121 ℃ ) 即开始灭菌，使其维持 15 ～ 30min 。对热不稳定的培 养基如含有葡萄糖、氨基酸等物质时，应适当降低压力 (0.56kg/cm 2 ) ，延长时间。