气相、高效液相色谱法简介教程文件.pptVIP

一、色谱法;叶绿体色素纸层析分离实验 （纸色谱）;1906年，俄国植物学家 茨威特分离植物叶绿体中 色素而得名，玻璃管中装 CaCO3,石油醚溶解植物 叶绿体倒入管内，再用石 油醚做淋洗剂，结果，柱 子中被分成几个不同颜色 的谱带。;三、色谱法的分类方法很多，最粗的分类是根据流动相的状态将色谱法分成四大类。 色谱法按流动相种类的分类： ;四、 气相色谱法（GC法）;; 实现色谱分离的先决条件是必须又固定相和流动相。 色谱柱：在色谱分析法中，内有固定相以分离混合组分的柱子（或玻璃管）。 固定相：色谱柱内不能移动的，起分离作用的物质； 流动相：在色谱柱中用于携带试样和洗脱组分的物质; 不同的物质在由固定相和流动相构成的体系中具有不同的分配系数; 当两项作相对运动时，这些物质也随流动相一起运动，并在两项间进行反复多次的分配; 这样就使在同一固定相上分配系数只有微小差别的组分，在固定相的移动速度发生了很大的差别，从而达到各组分的完全分离。; (二）气相色谱流程示意图：;载气;（三）气相色谱仪;;载气入口;;; 2、色谱图：样品中各组分经色谱过程后，按先后次序进入检测器，检测器就将流动相中各组分的浓度(或质量)的变化，转变成电压(或电流) ，由记录器记录下来，即得 到以组分浓度(或质量)变化为纵坐标，流出时间为横坐标的信号－时间曲线，称为色谱图。; ;3、气相色谱流出曲线有关术语 保留时间——从进样到出现组分浓度极大点 （色谱峰最高点）的时间tR 在一定固定相，一定操作条件下，各组分的 t 值不一样。同一组分有同样的 t 值，可用来作定性分析。此外，峰高（h）、峰面积（A）可用作定量分析。;A = h ×半宽度（峰高一半处色谱峰宽度） A=（底×高）／2 A 值 = 积分仪求得总面积的 94％。 计算 ① （一组分峰面积／94％） （ 总峰面积／94％） ② 以标准曲线来计算含量，以含量为横坐标，峰面积为纵坐标。 ;层析柱和???测器 1. 检测器有多种 ① 热导池检测器（TCD） 在气相色谱中应用最早、最广泛的检测器。灵敏度为100 ppm。 原理：不同组分和载气有不同的导热系数。当通过热导池的气体组成及浓度发生变化时，可引起热敏元件上温度的变化，由此而产生阻值变化，可衡量组分的含量。;;② 氢火焰离子化检测器（FID） 灵敏度比热导池检测器高1000倍，可在室温至300℃范围内使用。 原理：以H2（燃烧气）和空气（助燃气）的火焰为能源，在氢火焰附近装置两个电极（收集极、发射极），两个电极之间外加100~350V电压，当样品组分从色谱柱馏出后，由载气携带，与H2汇合，从喷嘴流出，与空气相遇，经引燃就燃烧。在氢火焰高温能源作用下，样品组分、电离成正、负离子，;在直流电场的作用下，离子向电极移动产生电流，这微小的电流经放大器放大后输入记录器，得出色谱峰信号。氢焰检测器（与单位时间内进入火焰组分的质量成正比，是典型的质量型检测器））对大多数有机物都很灵敏。但对在氢火焰中不电离的或电离很少的物质如N2、NO、CO、CO2、SO2、NH3、H2O、SiCl4、SiF4、HCN等，及无机物不能用这种检测器。 ;③ 电子捕获鉴定器（ECD） 是一种具有选择性和灵敏度很高的色谱检测器。 放射源—以同位素Ni63和3H为β射线放射源，将载气电离产生正离子和慢速低能量的电子，他们在恒定的电场作用下向极性相反的电极移动形成恒定的电流—基始电流。 当具有电负性的组分进入检测器时，它捕获了电子，变成带负电离子，并与载气产生的正离子结合成中性化合物，被载气带出检测器，结果使基始电流降低产生信号，形成峰值。 ;这种检测器是对具有电负性的物质（如含有卤素、S、P、N的物质）产生信号，且电负性越强，产生的灵敏度越高，有机氯农药含有卤素 Cl，所以非常适合。也属浓度型检测器。 另外还有火焰光度检测器（FPD）测含S、P化合物，在氢火焰中燃烧测其中发光情况。;2. 层析柱（色谱柱） 直径 2 ~ 3 mm，长 1 ~ 2 m，特殊的达十几米，玻璃、尼龙、金属—有机氯在高温下易挂壁，产生催化分解和吸附现象，干扰分析。 气液色谱固定相：担体 + 固定液。 要