质谱条件的优化策略简化板.pptVIP

APCI Summary ? Analyte type: ? low to mid polarity ? high proton affinity ? high gas phase acidity ? 1200 da ? Typical flow rates : 0.2 - 2.0 ml/min ? Tolerates buffers better than ESI ? Produces singly charged ions only ? Soft ionization technique ? Typical applications: Drugs, Pesticides, Steroids, Azo dyes 01332 液质分析条件的优化策略 （简化板） 液相色谱与液质联用仪使用的要点 ? 质量校正的正确 ? 对于相关分析要有合适的支持软件（ Maxnet ， TargeLyness ） ? 合适的液相色谱平台 ? 合适的质谱接口方式 ? 液相色谱分析中合适的色谱柱的选用 ? 质谱检测模式的选择 ? 必要的后液流补充 质量校正的正确（ Myoglobin 校正） 质量校正的正确（ Myoglobin 校正） 质量校正的正确（ CsI 校正）的肽测定 质量校正的正确（ CsI 校正）的蛋白测定 质量校正的关键点 ? 针对不同的分析采用不同的校正，一般 蛋白质采用 Myoglobin ，对于小分子分析 建议采用 CsI 校正。 ? 对于采用 Myoglobin 校正的建议采用高次 方的校正曲线（ 3-4 ）；对 CsI 校正的建议 采用低次方的校正曲线（ 1-2 ） 合适的液相色谱平台 ? 能提供一个连续、稳定的液流环境 ? 真空脱气设备 ? 系统的死体积尽可能小，减少管路的长度 ? 输液泵的设计能适用于微径柱的要求 ? 二极管阵列检测器的池体积与质谱仪匹配 ? 必要的液相色谱辅助配件 ? 必要的液相色谱与质谱仪的软件操作平台 合适的液相色谱柱 ? 柱内径： 2.1mm ? 柱长度： 根据分析的目的选择 50mm 或 150mm ? 柱填料选用新型的填料： Symmetry ， Discovery ， Vydac ， Zorbax ， Xterra ， Intersil ， Diamonsil 等 LC/MS Flow Injection Analysis of Peptides and Proteins by Reversed-Phase HPLC 1.0% HOAc min A b u n d a n c e 10.00 12.00 14.00 16.00 2.00 4.00 6.00 8.00 50000 100000 150000 200000 250000 0.2% TFA 2.00 4.00 6.00 8.00 10.00 12.00 14.00 16.00 50000 100000 150000 200000 250000 min A b u n d a n c e ? Reverse-Phase LC/MS Solvents – ACN, MeOH, H 2 O, Isopropanol ? Normal-Phase LC/MS Solvents (for APCI-MS) – Hexane, Methylene Chloride, Acetone, Ethanol ? Compatible LC/MS Buffers and Modifiers: – Formic acid, acetic acid, ammonium acetate, ammonium formate, ammonium hydroxide, trifluoroacetic acid – TF A concentration should be 0.1% v/v – Keep volatile buffer concentrations 20 mM to minimize ESI ion suppression ? Avoid Non-volatile Buffers – Alkali-metal phosphates, borates, etc. Suitable Solvents for LC/MS ? V olatile buffer – minimize instrument downtime ? Buffer concentration: – High ? ion suppression decreases ESI sensitivity – Low ? system adequately buffered? ? pH range permitted by stationary phase ? M