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菌种保藏方法 (来源:微生物保藏管理中心)  定期移植法 　　亦称传代培养保藏法，包括斜面培养、穿刺培养、液体培养等。 是指将菌种接种于适宜的培养基中，最适条件下培养，待生长充分后， 于 4～6℃进行保存并间隔一定时间进行移植培养的菌种保藏方法。 　　操作步骤如下： 1 培养基制备 1.1 器皿准备 　　培养基制备 程中所用的一些玻璃器皿，如三角瓶、试管、培 养皿、烧杯、吸管等，经洗涤、干燥、包装、灭菌后使用。 1.2 溶解培养基配料 　　先在烧杯中放适量水，按培养基配方称取各项材料，依次将缓 冲化合物、主要元素、微量元素、维生素等材料加入水中溶解，最后加 足水量，搅拌均匀。 1.3 调 pH 值 　　配料溶解后将培养基冷却至室温，根据要求加稀酸（0.1mol/L 盐酸）或稀碱(10%氢氧化钠)调 pH 值。加酸或碱液时要缓慢、少量、多 次搅拌，防止局部 碱或 酸而导致测量不准确和营养成分被破坏。 1.4 加凝固剂 　　配制固体培养基时需加凝固剂，如琼脂、明胶等。将凝固剂加 入液体培养基中，加热并不断搅拌至融解，再补足所蒸发水分。 1.5 过滤分装 　　在二层纱布中间夹入脱脂棉，将配好的培养基趁热过滤并分 装。斜面培养基分装量约为试管高度的四分之一(4～5mL)，穿刺培养 基分装量以试管高度的二分之一为宜。分装 程中勿使培养基沾污管 口，以免弄湿棉塞造成污染。 1.6 包扎标记 　　将试管加棉塞，外面包扎一层牛皮纸或铝箔并注明培养基名 称及配制日期。 1.7 灭菌 　　根据要求将培养基灭菌，通常蒸汽灭菌为 121℃，15～20min。 1.8 斜面摆放 　　灭菌后及时摆放斜面，斜面长度不超过试管管长的二分之一 为宜。 1.9 无菌检查 　　将灭菌的培养基放入培养箱中作无菌检验，通常30℃培养 1～ 3 天。无菌检查合格后将其保存于 4℃下备用。 2 接种 2.1 斜面接种 2.1.1 点接 　　把菌种点接在斜面中部偏下方处。适用于扩散型生长及绒毛 状气生菌丝类霉菌（如毛霉、根霉等）。 2.1.2 中央划线 　　从斜面中央自下而上划一直线。适用于细菌和酵母菌等。 2.1.3 稀波状蜿蜒划线法 　　从斜面底部自下而上划“之”字形线。适用于易扩散的细菌，也 适用于部分真菌。 2.1.4 密波状蜿蜒划线法 　　从斜面底部自下而上划密“之”字形线。能充分利用斜面获得大 量菌体细胞，适用于细菌和酵母菌等。 2.1.5 挖块接种法 　　挖取菌丝体连同少量培养基，转接到新鲜斜面上。适用灵芝等 担子菌类真菌。 2.2 穿刺接种 　　用接种针从原菌种斜面上挑取少量菌体，从柱状培养基中心 自上而下刺入，直到接近管底（勿穿到管底），然后沿原穿刺途径慢慢 抽出接种针。适用于细菌和酵母菌等。 2.3 液体接种 　　挑取少量固体斜面菌种或用无菌滴管等吸取原菌液接种于新 鲜液体培养基中。 3 培养 　　将接种后的培养基放入培养箱中，在适宜的条件下培养至细 胞稳定期或得到成熟孢子。细菌培养温度一般为 30～37℃，真菌培养 温度一般为 25～28℃。 4 保藏 　　培养好的菌种于 4～6℃保存，根据要求每 3～6 个月移植一次。 某些菌种，如芽裂酵母，阿舒假囊酵母，棉病囊霉等，须 1～3 个月移 植一次。 　　保藏湿度用相对湿度表示，通常为 50%～70%。 斜面菌种应保藏相继三代培养物以便对照，防止因意外和污染造 成损失。 液体石蜡保藏法 　　亦称矿物油保藏法,定期移植保藏法的辅助方法。是指将菌种 接种在适宜的斜面培养基上，最适条件下培养至菌种长出健壮菌落后 注入灭菌的液体石蜡，使其覆盖整个斜面，再直立放置于