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- 2020-07-24 发布于河北
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四川大学本科生课程化学工艺学 */88 7.4.3 种子的扩大培养 培养基(主要碳源)的选择: 1、淀粉水解糖;(以FML8611菌种为例) 2、糖厂的下脚甘蔗糖蜜、甜菜糖蜜、乙醇、正构石蜡等化工原料。 淀粉水解糖工艺:溶解、糖化、过滤、蒸发、糖液浓缩等。 表:种子培养基和发酵培养基的组成 组 成 种子培养基/% 发酵培养基/% 淀粉水解糖 2.5 18 糖蜜 / 9 玉米浆 1.5 2 豆饼水解液 2.5 4.5 硫酸铵 0.5 6 磷酸二氢钾 0.12 0.12 硫酸镁 0.04 0.04 硫酸锰 0.002 0.002 硫酸亚铁 0.002 0.002 尿素 0.2 四川大学本科生课程化学工艺学 */88 在实验室培养好或储存的细菌种子在规模化生产时需首先在种子罐中扩大培养,然后再移入作为细胞反应器的发酵罐。 种子扩大培养级数确定:发酵类型、菌种特性、发酵工艺和发酵罐规模来决定。 根据发酵罐规模采用二级或三级种子培养,培养温度均为30~32℃。 (1)一级种子培养:采用摇床,冲程76mm,频率100~120次/min,15~16h,可以用1000ml三角瓶装200ml进行培养。 (2)二级种子培养:10~20h,以淀粉水解糖代替葡萄糖,其余同一级。 (3)三级种子培养:7~8h。其他参数如下: 种子罐的操作条件 种子罐的规模/L 搅拌速度/r?min-1 通气量/m3?(min?m3)-1 50 340~360 0.5 500 260~280 0.35 1200 180 0.3 四川大学本科生课程化学工艺学 */88 7.4.4 多相发酵过程 发酵培养基成分:碳源+氮源+生长因子+无机盐和微量元素等 碳源:用来构成菌体,供给菌体代谢活动的能量以及合成赖氨酸的营养物质。(糖类、脂类、有机酸、醇类和烃类等) 氮源:来源于营养液中的尿素和氨盐 生长因子:指豆饼中含的高丝氨酸、苏氨酸、蛋氨酸、丙氨酸、亮氨酸等,以补充菌株生长的需要。 发酵过程分为两个阶段: (1)发酵前期/长菌期:约0~24小时,主要是菌体生长繁殖,产酸很少。 (2)产酸期:菌体生长到一定时期后,转入产酸期。 工艺条件控制如下: (1)发酵温度 30~32℃/ 32~34℃ (2)pH值控制 6.5~7.0 (3)种龄和种量 (4)供氧对赖氨酸发酵的影响 供氧程度 (5)培养液配方的影响:维生素、生物素等用来调节代谢的添加剂 四川大学本科生课程化学工艺学 */88 (1)粘度较大时采用机械搅拌式发酵罐 机械搅拌式发酵罐(双层六弯叶涡轮搅拌器) 设计比例:H/D=2~2.5:1 DR搅拌器/D=0.3~0.5 搅拌器间距为0.08~0.1D (2)粘度小、杂质少时采用气升式反应器 细胞反应器类型 发酵过程通常不如普通化学反应快,细胞反应器内流体运动较为缓和,因此体积宠大,气流速度较低,但流量较大。 图7-42 细胞培养气升式环流反应器 四川大学本科生课程化学工艺学 */88 中型的细胞培养装置流程图 生物类浆液:淀粉经淀粉酶水解糖化后经过滤成为葡萄糖 无机盐和尿素溶液 目前年产1万吨的赖氨酸单体发酵罐可达到200m3。 四川大学本科生课程化学工艺学 */88 7.4.5 赖氨酸的后续分离流程 (自学) 用途: (1)饲料添加剂:直接经真空浓缩,进入离心喷雾干燥,最后加入适当的填料改善物性,混合包装。 (2)药品制剂:必须经提纯和精制。发酵液经预处理、离子交换柱、真空浓缩、加水溶解脱色过滤、二次浓缩、二次结晶、干燥、包装即得成品。 图 赖氨酸的提纯和精制流程 四川大学本科生课程化学工艺学 */88 赖氨酸的提取除了采用离子交换法外,还有沉淀法,有机溶剂法,电渗析法。工业上一般采用离子交换法。在不同pH值下,赖氨酸在水中有四种离解形式。 (1)发酵液预处理 (2)离子交换树脂的选取 离子交换法除去菌体等固体杂质和Ca2+。 Ca2+:加入草酸或浓硫酸,生成钙盐沉淀后分离除去。 固相微粒:可添加如聚丙烯酰胺类的絮凝剂,使菌体等固相物凝聚而沉淀,加助滤剂除去;或采用高速离心机,转速为4500~6500r/min。(国外) 四川大学本科生课程化学工艺学 */88 图7-45 赖氨酸的离解曲线 赖氨酸是二氨基一羧基的氨基酸,等电点(pI)为9.59,对应的pH=2.0。这点附近,因赖氨酸离解出大量的一价和二价阳离子,可强烈地被强酸性阳离子树脂吸附,并且这种情况下可优先选择二价阳离子。考滤各方面的因素,采用强酸性阳离子树脂,一般操作参数选取pH=2.0~3.0较为合适。 pH
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