第六章高效液相色谱法1培训讲学.pptVIP

输液泵操作注意事项： 防止固体微粒进入泵体 流动相不应含有腐蚀性物质 防止溶剂瓶内的流动相被用完 不超过规定的最高压力 流动相一般应该先脱气 3、过滤器 （1）作用：除杂质。 （2）类型： 溶剂过滤器、管道过滤器。 4、梯度淋洗装置 （1）作用：缩短时间，使各组分完全分离。 （2）类型： ①高压梯度：利用两台高压输液泵，将两种不同极性的溶剂按一定的比例送入梯度混合室，混合后进入色谱柱。 ②低压梯度：一台高压泵, 通过比例调节阀，将两种或多种不同极性的溶剂按一定的比例抽入高压泵中混合。 流路中为高压力工作状态， 通常使用耐高压的六通阀进样装置。 （二） 进样系统 （三）色谱柱系统 柱体为直型不锈钢管，内径1～6 mm，柱长5～40 cm。 发展趋势是减小填料粒度和柱径以提高柱效。 （四）检测器系统 1、紫外检测器 应用最广，对大部分有机化合物有响应。 适于：吸收紫外光的物质。 特点：灵敏度高； 线形范围高； 流通池可做的很小（1mm×10mm，容积 8μL）； 对流动相的流速和温度变化不敏感； 波长可选，易于操作； 可用于梯度洗脱。 2、光电二极管阵列检测器 紫外检测器的重要进展； 光电二极管阵列检测器：1024个二极管阵列，各检测特定波长，计算机快速处理，三维立体谱图，如图所示。 光电二极管阵列检测器 原理：每种物质具有不同的折光指数。可连续检测参比池和样品池中流动相之间的折光指数差值，差值与浓度呈正比。 特点：灵敏度低、对温度敏感、不能用于梯度洗脱；偏转式、反射式和干涉型三种。 3、示差折光检测器 除紫外检测器之外应用最多的检测器。 第六章 高效液相色谱法 一、HPLC与经典LC区别 二、HPLC与GC差别 三、特点 高效液相色谱法：以气相色谱为基础，在经典液相色谱实验和技术基础上建立的一种液相色谱法。 一、HPLC与经典LC区别 主要区别：固定相、输液设备和检测手段 1．经典LC：仅做为一种分离手段 柱内径1~3cm，固定相粒径100μm 且不均匀 柱效低（H↑，n↓） 常压输送流动相 分析周期长 无法在线检测 2．HPLC：分离和分析 柱内径2~6mm，固定相粒径10μm（球形，匀浆装柱） 柱效高（H↓，n↑） 高压输送流动相 分析时间大大缩短 可以在线检测 二、HPLC与GC差别 相同：兼具分离和分析功能，均可以在线检测 主要差别：分析对象、流动相、操作条件的差别 1．分析对象 GC：能气化、热稳定性好、且沸点较低的样品， 高沸点、挥发性差、热稳定性差、离子型及 高聚物的样品不可检测 占有机物的20% HPLC：溶解后能制成溶液的样品， 不受样品挥发性和热稳定性的限制 分子量大、难气化、热稳定性差及高分子 和离子型样品均可检测 用途广泛，占有机物的80% 2．流动相差别 GC： 流动相为惰性气体，组分与流动相无亲合作用力，只与固定相作用 输送流动相压力为2~20MPa HPLC： 流动相为液体，流动相与组分间有亲合作用力，为提高柱的选择性、改善分离度增加了因素，对分离起很大作用 输送流动相压力为0.1~0.5MPa 3．操作条件差别 GC：加温操作 HPLC：室温；高压（液体粘度大，峰展宽小） 三、HPLC的特点和应用 “三高” “一快” “一广” 高柱效——n=104片/米，柱效高（远高于一般LC） 高灵敏度 高选择性 分析速度快 应用范围广泛（可分析80%有机化合物） 第一节 HPLC的主要类型及选择 液-固吸附色谱 液-液分配色谱 键合相色谱 凝胶色谱 离子交换色谱 类型 一、液-固吸附色谱 流动相为液体，固定相为固体吸附剂 1、基本原理：各组分吸附能力的差异进行混合物分离的； 2、固定相：为固体吸附剂 极性固定相：硅胶（酸性）、氧化镁、分子筛（碱性）； 非极性固定相：活性炭、炭黑 较常使用的是5～10μm的全多孔型硅胶吸附剂。 3、流动相（也称洗脱液）： 选择原则：“相似相溶”原则 各种不同极性的一元或多元溶剂。 4、应用： （1）分离极性不同的化合