植物叶片DNA提取步骤.docVIP

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2020-07-27 发布于河北
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植物叶片DNA提取步骤.doc

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植物叶片DNA提取方案 CTAB 法基本步骤如下：①取鲜样0．2 g 左右置研钵中，加2％不溶性PVP、液氮研磨至粉末状，转入2 mL 离心管；②加入0．7 mL 65℃预热的CTAB 提取液，混匀，65℃水浴30 min； ③加入等体积酚／氯仿／异戊醇（25∶24∶1），混匀，室温10 000 r／min离心10 min；④取上清液，重复步骤③1～2 次；⑤取上清液，加1／2 体积的5 mol／L NaCl，加2／3体积的异丙醇，置－20℃冰箱2 h，沉淀DNA；4℃、10 000 r ／ min 离心10min；⑥弃上清，用70％乙醇溶液洗沉淀2 次，风干，用50 μL TE溶解； ⑦加入无DNase 的RNase 至终浓度为10 μg／μL，37℃保温30 min，－20℃保存备用。(8)加入终浓度5099／ml的RNase，37℃保温1h；(9)用等体积的氯仿／异戊醇抽提1次，12000rpm，离心10min；(10)上清液中加入O．1倍体积的Nacl，2倍体积的无水乙醇，冰箱中-20℃放置0．5h，12000rpm，离心10min，去上清液；(11)用70％的无水乙醇洗涤沉淀2次，自然干燥后溶于50plTE；） 2%CTAB提取液：100 mmol／L Tris－HCl（pH8.0），1.4 mol／L NaCl，20 g／L CTAB，20 mmol／L EDTA，1％β－巯基乙醇（用前加）。