真核细胞kozak序列.docVIP

kozak序列 　　kozak序列： Kozak consensus sequence, Kozak consensus or Kozak sequence 人类起始密码子周围的序列 　　存在于真核生物mRNA的一段序列，其在翻译的起始中有重要作用。 　　核糖体能够识别mRNA上的这段序列，并把它作为翻译起始位点。注意这段序列并不是ribosomal binding site (RBS)核糖体结合位点，而是帽子结构。 　　真核生物基因中起始密码子上下游的最佳序列为，-3位为嘌呤碱基；+4位为G，起始密码子AUG中的A处于+1位。A/GCCAUGG被称为kozak序列或扫描序列。 　　KOZAK是一个女科学家，她研究过起始密码子ATG周边碱基定点突变后对转录和翻译所造成的影响，并总结出在真核生物中，起始密码子两端序列为：—— G/N-C/N-C/N-ANNATGG——，如GCCACCATGG、GCCATGATGG时，转录和翻译效率最高，特别是-3位的A对翻译效率非常重要。该序列被后人称为Kozak序列，并被应用于表达载体的构建中。 　　所谓Kozak规则，即第一个ATG侧翼序列的碱基分布所满足的统计规律，若将第一个ATG中的碱基A，T，G分别标为1，2，3位，则Kozak规则可描述如下： 　　(1)第4位的偏好碱基为G； 　　(2)ATG的5’端约15bp范围的侧翼序列内不含碱基T； 　　(3)在-3，-6和-9位置，G是偏好碱基； 　　(4)除-3，-6和-9位，在整个侧翼序列区，C是偏好碱基。 　　Kozak规则是基于已知数据的统计结果，不见得必须全部满足，一般来说，满足前两项即可。 　　真核引物设计需在ATG前加上GCCACC 　　不论全长还是部分，在做真核表达时，一般都要带上kozak序列，用部分cDNA时，还要加上ATG。多加一些上游序列对你有利，因为一些上游序列自带KOZAK序列；或其他促进表达的序列。.有利于引物设计，因为从ATG开始设计引物，不是每个基因都可以的。引物扩增时头几个容易错，在上游序序列就没关系了。 　　加Kozark sequence(GCCACC),kozak sequence是用来增强真核基因的翻译效率的。是最优化的ATG环境，避免ribosome出现leaky scan 在真核起始过程中，由Met-tRNAi，eIF-2和GTP形成了三元复合体（ternary complex）再结合40S小亚基形成前起始复合物(preinitiation complex)。此复合物的形成分为二步：首先GTP和eIF-2结合，以增加此因子与Met-tRNA．结合的效率。然后三元复合体再与40S亚基结合。核糖体结合位点由起始密码子所决定，在某些起始密码子上游邻接序列也可能十分重要，被称为Kozak序列(ACCAUGG)，它相当于原核的S-D序列。前起始复合物结合5′7meG帽结构并沿着mRNA扫描，借助Kozak序列搜寻第一个起始密码子。