一 土壤微生物的分离与鉴定.pptVIP

* * 微 生 物 学 实 验 制作人员: 张敦林、周业飞、周红霞 （一）实验目的 （二）实验原理 （三）实验器材 （四）实验方法 （五）实验作业 土壤的稀释分离、纯化及无菌 操作技术 实验二 （一）实验目的 1、了解微生物分离和纯化的原理 2、掌握倒平板的方法和几种常用的分离纯化接种培养的基本操作技术，掌握微生物的无菌操作技术。 （二）实验原理 在自然界中，不同种类的微生物绝大多数都是混杂生活在一起的，为了生产和科学研究的需要，当我们希望获得某一种微生物时，就必须从混杂的微生物类群中分离出它，以得到只含有这一种微生物的纯培养物，这种获得纯培养物的方法称为微生物的分离与纯化。 为了获得纯种的微生物，一般根据该微生物营养或培养特点，或对某种抑制剂的耐受性不同，或对某种环境条件要求不同，从而制作或设置一些选择性培养基，或选择性培养条件，再用稀释涂布平板法或稀释混合平板法或划线法分离，纯化该微生物，直至得到该纯种菌株。 （三）实验器材 1. 样品 土样 2.培养基 牛肉膏蛋白胨琼脂培养基、马铃薯葡萄糖琼脂培养基、豆芽汁培养基。 3.其它 盛9ml无菌水的试管、盛90ml无菌水并带有玻璃珠的三角瓶、无菌玻璃涂棒、无菌吸管、接种环、无菌培养皿。 （四）实验方法 （一）、稀释混合平板法 图14-1 从土壤中分离微生物操作过程 （1）土壤稀释液的制备 ① 称取土样10g，放入盛90ml无菌水三角瓶中，振荡15～20分钟，使微生物细胞分散，静置约20～30秒，即成10-1的土壤悬液。 ② 另取装有9ml无菌水的试管，编号为10-2、10-3、10-4、10-5、10-6及10-7，用无菌吸管吸取10-1土壤悬液lml，加入编号10-2的无菌试管中，吹吸三次，使之混合均匀，即成10-2的土壤稀释液。再用另一支吸管吸取10-2试管中的土壤稀释液1ml，加入编号10-3的无菌试管中，轻轻摇动，使之混合均匀，即成10-3的土壤稀释液，一定要每次更换一支无菌吸管（连续稀释）。同法依次分别稀释成10-4、10-5和10-6等一系列稀释度菌悬液 （2）平板制作 将无菌培养皿编上10-4、10-5、10-6号码，每一号码设三个重复，用1ml无菌吸管按无菌操作要求吸10-6稀释液各1ml，分别放入编号10-6的三个培养皿中。同法吸取10-5稀释液各1ml，分别放入编号10-5的三个培养皿中。再吸取10-4稀释液各1ml，分别放入编号10-4的三个培养皿中。然后在9个培养皿中分别倒入15ml已融化并且冷却至45℃左右的牛肉膏蛋白胨琼脂培养基，加盖后轻轻摇动培养皿，使培养基均匀分布，平置于桌面上，待凝固后即成平板，整个操作过程应严格按照无菌操作 （3）培养与移植 待平板完全冷凝后，将平板倒置37℃恒温箱中培养24～48小时，检查分离结果。将培养后长出的单个菌落分别挑取接种到牛肉膏蛋白胨培养基的斜面上，然后置于37℃恒温箱中培养，待菌苔长出后，检查菌苔是否单纯，也可用显微镜涂片染色检查是否是单一的微生物，若有其它杂菌混杂，就可再一次进行分离、纯化，直至获得纯培养。