核酶抗体酶课件.ppt

Company Logo 建议的 L19 RNA 催化机理 Company Logo 锤头型核酶对切割位点的识别 位点遵守 NHH 规则（ N 代表任 意核苷酸， H 代表 A,U 或 C ） 。催化过程需要二价金属离子 参与。 单金属离子催化 双金属离子催化 Company Logo Company Logo Company Logo 核 酶（ Ribozyme) ? 一、 概述 ? 二、 剪接型核酶 ? 三、 剪切型核酶 ? 四、 核酶的应用 ? 五、 核酶技术面临的问题 ? 六、 脱氧核酶 （ deoxyribozyme) Company Logo 1 、 对酶及生物催化剂的认识的发展 一、概 述 生物催化剂 （ Biocatalyst ） 蛋白质类：天然酶 enzyme 极端酶 extremozyme 抗体酶 abzyme 生物工程酶 其它：模拟酶 核酸类 : 克隆酶 遗传修饰酶 蛋白质工程新酶 、 Ribozyme Deoxyribozyme Company Logo 2 、长期以来，人们认为只有某些蛋白质才有生 物催化功能。但近些年研究发现，某些 RNA 分 子也具有生物催化功能，被称为 Ribozyme 。 1982 年 Cech 等发现四膜虫细胞大核期间 26SrRNA 前体具有自我剪接功能，并于 1986 年 证明其内含子 L-19IVS 具有多种催化功能。 1984 年 Altman 等发现 RNaseP 的核酸组分 M 1 RNA 具有 该酶的活性，而该酶的蛋白质部分 C 5 蛋白并无 酶活性。 Cech 和 Altman 因发现 Ribozyme 而获得 1989 年度诺贝尔化学奖。 Company Logo ? 3 、核酶作用的特点 ? 化学本质 RNA ? 底物 RNA 肽键 ā - 葡聚糖分支酶 ? 反应特异性 ( 专一性）碱基 ? 催化效率 低 ? 产物 Company Logo 剪切型核酶 剪接型核酶 根据催化反应 锤头核酶 I 内含子 II 内含子 发夹核酶 丁型肝炎病毒（ HDV) 核酶 RNaseP 4. 核酶的分类 Company Logo 核酶是一种金属依赖酶 ? 金属离子的作用 ： ? 1 、特异的结构作用，或参与活性部位的 化学 过程 ? 2 、促进 RNA 的总体折叠 ? 3 、二价金属离子（如 Mg 2+ ）与底物活性部位 直接相互作用，参与过渡中间复合物的形成 Company Logo 2 、Ⅱ类内含子的自我剪接 ? 剪接机制 ? 结构与功能的关系 Company Logo 三、剪切型核酶 ? 1 、自身催化剪切型 RNA ? 1 、 1 剪切机制 ? 1 、 2 结构与功能的关系 ? 锤头结构 (Hammerhead) ? 发夹结构 (Hairpin) ? 斧头结构 (Axehead) ? 假结样结构 (Pseudoknot-like) ? 1 、 3 影响核酶活性的因素 Company Logo ? 2 、异体催化剪切型 RNA ? 核糖核酸酶 P(RNaseP) 是内切核酸酶，是核 糖核蛋白体复合物，能剪切所有 tRNA 前体的 5 ‘端，除去多余的序列，形成 3 -OH 和 5 - 磷酸末端。 ? RNaseP 由 M1RNA 和蛋白质亚基组成。 ? 体外： M1RNA 具催化作用 ? 蛋白质作为辅助因子 ? 体内： M1RNA 和蛋白质对酶活性都是必需的。 ? 2 、 1 剪切机制 Mg 2+ ? 2 、 2 结构与功能的关系 M1RNA 5 ‘端完 整结构对维持催化活性是必需的。 ? 胰腺癌护理 胰腺癌康复 胰腺癌饮食： Company Logo RNaseP 可剪切 前体 5 ‘端