致肾脏、肠道病变大肠杆菌的分离及生物特性鉴定.pptVIP

2008-6-25 第五章 家禽主要传染病 第十五节 传染性鼻炎（0.5学时） 重 点 1、鸡副嗜血杆菌的培养特性； 2、传染性鼻炎与鸡毒支原体感染、传染性喉气管炎、传染性支气管炎和曲霉菌病的鉴别诊断； 3、传染性鼻炎的诊断方法； 一、简 介 鸡传染性鼻炎是由副鸡嗜血杆菌引起鸡的一种急性上呼吸道传染病，主要特征是流鼻涕、打喷嚏、面部肿胀、结膜发炎、鼻腔和窦腔粘膜发炎，产蛋下降。本病主要侵害育成鸡和产蛋鸡，严重影响鸡群生长发育和产蛋，所以对养鸡业危害较大，常造成严重的经济损失。我国将其列入三类动物疫病。 1、病 原 鸡副嗜血杆菌为一种G—两极着色，特别是从病鸡窦分泌物检出时。无运动性，菌菌的形态随培养时间不同而变化：培养24小时时呈短杆，并带有成丝倾向，48-60小时则发生退化，出现碎片和不整形态。此菌可出现单个，成对或形成短链，新分离的有毒力菌株具有荚膜。 本菌在普通培养基不能生长，需要V因子的培养基，V因子是不耐热成份即NAD（辅酶I）。存在于红血球中和血清中酵母膏中含量丰富，葡萄球菌亦产生。血清中含有抑制抗体和核苷酸没，如制成巧克力琼脂（70℃，30分）可将上述物质破坏。“卫星现象”是该病原菌的重要特征，在5-10%CO2存在条件下，37℃生长良好，形成直径0.3mm左右、园形隆起,边缘整齐,灰白色丰透明,带光泽的露滴样菌落,培养初期的菌落湿润,有明显的荧光,有荚膜，称为粘液变种M,长时间培养,则荧光消失，荚膜失去,这称为粗糙变种R。 生化:用标准培养基进行,发酵果糖、葡萄糖、甘露糖、不发酵海藻糖、半乳糖。 三、临床症状 潜伏期1-3天。 最显著的症状是：流鼻涕、流泪、面部水肿，发生下呼吸道感染时引起罗音，部分鸡尚引起腹泻，此外，公鸡肉髯、母鸡的下颌部分分别可见浮肿性肿胀，母鸡产蛋量下降至停止。据日本学者统计：100%的病例出现流鼻涕、面肿，70%有流泪，56%有下痢，30%排绿便，30%有呼吸杂音和异常，15%见有肉垂和喉头肿胀。 病程依鸡的日龄、购买条件和和菌株的毒力而异，通常经2周左右，症状有消失即恢复，不发生死亡，但在野外由于其它菌毒的继发感染病程变长，预后各不相同。 四、病 变 鼻腔、窦粘膜呈急性卡他性炎，粘膜充血肿胀，表面盖有大量粘液，窦内有渗出物凝块，后成为干酪样坏死物，常见有卡他性结膜炎，结膜充血肿胀，脸部及内髯皮下水肿，还见有肺炎和气囊炎。 五、诊 断 本病需与慢性呼吸道病，慢性禽霍乱，禽痘和VitA缺乏症相区别，特别是注意并发感染。 1．病原分离鉴定：用无菌棉拭子采自急性期病鸡2～3只，从窦腔内、气管、气囊采病料，直接在血液琼脂上划线，然后用葡萄球菌划横线，点燃蜡烛即盖上广口瓶，37℃培养。如果经24～48小时后能发现G—卫星样生长杆菌，且过氧化氢酶阴性，在血液或鸡血清肉汤琼脂上生长而在普通琼脂上不生长的话，则进一步做生化试验和血液学鉴定。 实际工作中，很少采集鼻汁作为培养材料，主要是虽含菌多，但污染（杂菌）也较严重，有人认为血中正常抗体有抑菌作用及核苷酸分解酶使培养基中的V因子分解，生长效果往往不理想，因此加入血后应放70℃保持30分钟，以灭活其中酶和抗体,制成巧克力琼脂培养基,可以得到较好的分离培养结果,但据中监所资料,以鸡血清鸡肉汤,琼脂效果最佳。 另一有效方法是人工感染试验，可用窦内分泌物或培养物作接种材料，眶下窦内接种2-3只鸡，在1-2天出现病状。 2．血清学诊断：常用的血清学实验包括平板试管凝集、AGP（琼脂凝胶沉淀）、HI。 （1）血清平板凝集反应：制备抗原用培养基可用固体/液体培养基，均于37℃培养，前者在CO2条件下培养16～18小时，用生理盐水或PH7.2的PBS将菌体洗下，离心洗涤3次，再悬浮于含0.01%硫柳汞的生理盐水中，使浓度为麦氏比浊管第2管的10倍，用液体（如鸡血清鸡肉汤）培养基，在常规条件下培养18-20小时，离心集菌的方法同前。 操作：在玻片上滴加供试血清和抗原各一滴（0.05ml）3分钟内出现明显凝集颗粒的判为阳性，本反应宜在20～25℃条件下进行。 （2）试管凝集：抗原是将上述用抗原再用0.01%硫柳汞生理盐水作10倍稀释,血清从5倍开始作倍比稀释(各管0.25ml)加入等量抗原,充分混合后置37℃2小时,再在5℃静置18～20小时作判定,有明显凝集的血清最终稀释度作为凝集价,效价在1:5稀释即为阳性。 另加强试验敏感性,代表所有血清型的复合抗原推荐作为凝集试验用,某些制剂可能出现自凝或不凝集,可分别用胰蛋白酶和透明质酸酶处理而得到满意效果,最近Yamaguchi etal还将多糖抗原吸附于乳胶凝集颗粒上，创建了一种血清型特异性凝集试验。 （3）琼扩（AGPT）：可用凝