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蛋白质标准曲线的制作
买验目
⊙学习考马斯亮蓝( Coomassie brilliant
Bue)法测定蛋白质浓度的原理和方
法
、实验原
⑨一般用分光光度法测物质的含量,先要制作标
准曲线,然后根据标准曲线查出所测物质的含
量
⑨考马斯亮蓝法测定蛋白质浓度,是利用蛋白质
染料结合的原理,定量的测定微量蛋白浓度
的快速、灵敏的方法
考马斯亮蓝G-250存在着两种不同的颜色形式,
红色和蓝色。它和蛋白质通过范德华力结合,
在一定蛋白质浓度范围内,蛋白质和染料结合
符合比尔定律(Beerslaw)。此染料与蛋白
质的碱性氨基酸(特别是精氨酸)和芳香族氨
基酸残结合,通过测定595nm吸光度可测定蛋
白质的含量。另外,反应体系中呈现的颜色变
化主要是G-250分子间疏水相互作用形成的聚集
体聚集程度不同引起的。单体形式表现为蓝色
单体和聚集体共存时表现为绿色,全为聚集体
形式呈现为棕红色。影响因素主要为溶液体系
中磷酸、乙醇、NaCl的含量。
Coomassie Dye-Based蛋白质定量
PROTEIN
LUE
Protein-Dye
max=595nm
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