基因工程药物蛋白分离纯化和质量控制.ppt

重组基因工程药物的分离 纯化及质量控制 基因工程药物制造的一般流程: (1)获得目的基因 (2)组建重组质粒; (3)构建基因工程菌; (4)培养工程菌; (5)产物分离纯化; (6)除菌过滤 7)半成品检定; (8)包装 基因工程药物特点: (1)目的产物在初始原料中的含量较低; (2)含目的产物的初始物料组成复杂,除了目的产物外, 还有大量的细胞、代谢、残留培养基、无机盐等,特 别是产物类似物对目的产物的分离纯化影响很大; (3)目的产物的稳定性差,具有生物活性的物质对 H、温度、金属离子、有机溶剂、剪切力、表 面张力等十分敏感,容易是其失活、变性; (4)种类繁多,包括大、中、小分子、结构简单或 复杂的有机化合物,以及结构复杂又性质各异 的生物活性物质; 5)应用面广,对其质量、纯度要求高,甚至要求 无菌、无热源。 建立分离纯化工艺的根据 目的产物含有大量杂质必须进行分离纯化。 蛋白质分离纯化方法的设计根据其分子的理 化性质和生物学特性来决定。 产物特性 作 用 等电点 决定离子交换种类及条件 相对分子量 选择不同孔径的介质 疏水性 与疏水、反相介质结合的程度 生物特异性 决定亲和配基 溶解性 决定分离体系及蛋白浓度 稳定性 决定工艺采用温度及流程时间 建立分离纯化工艺的根据 1、含目的产物的起始物料的特点 利用基因工程菌进行发酵生产的产物,其上游过程 中的各种因素均对分离纯化技术和工艺有直接影响。 (1)菌种类型及其代谢特性:包括菌种的生物学性质, 产物和副产物种类、产物在细胞内所处的位置,表达方 式(胞内、胞外、包含体),代谢物种类、产物类似物、 毒素和能降解产物的酶类等; (2)原材料和培养基的来源及其质量;