EDU-细胞增殖检测.pdfVIP

. 荧光显微镜检测方法 (以96孔板， A549 贴壁细胞为例 ) 细胞培养 3 5 取对数生长期细胞，以每孔 ~14 ××1010细胞接种于 96 孔板中，培养至正常生长阶段。 药物处理 ( 可选 )客户可以根据实验需要进行各种药物处理。 EdU 标记 1.1 用细胞培养基按 1000 ：1 的比例稀释 EdU 溶液 (试剂 A) ，制备适量 50 μ M EdU培养 基； 注： 1)EdU 浓度与孵育时间相关，短时间孵育 (2h) 宜采用高浓度 (10~50μ M) ，长时间 孵育 (24h) 宜采用低浓度 (1~10 μ M) ； 2) 如果需配置 10 μ M EdU培养基，需调整为 5000 ： 1稀释比例； 3) 配置好的培养基的保存时间取决于培养基的性质。 表 1 EdU 培养基及染色反应液的使用量参考 96 孔板 * 48 孔板 24 孔板 12 孔板 6孔板 5.5 cm 小皿 EdU 培养 100 μl 150 μl 200 μl 300 μl 500 μl 2 mL 基 染色反应 100 μl 150 μl 200 μl 300 μl 500 μl 2 mL 液 注：1)* 表示贴壁细胞通常采用的培养容器， EdU 培养基与染色反应液用量以覆盖细胞为宜； 2) 悬浮细胞 EdU 用量依据培养体积而定。 可编辑 . 1.2 每孔加入 100 μ L 50 μ M EdU培养基孵育 2 小时，弃培养基； 注： 1)最佳孵育时间与细胞周期相关 (表2) ，大多数细胞系均可采用 2 小时孵育时间； 2)EdU 培养基用量以没过细胞为宜，但需要保证 EdU 孵育时间内的营养物质持 续供给 (表 1) ； 1.3 PBS 清洗细胞 1~2 次，每次 5 分钟。 注：清洗目的是将未渗入 DNA 的 EdU 洗脱，清洗方式依据不同的细胞类型而定，贴壁 不牢的细胞请降低清洗强度。 表 2 EdU 孵育时间设定参考 3T3 Hela HEK293* 人成纤维细 人宫颈癌细 细胞系 人胚胎细胞 酵母细胞 人胚肾细胞系 人神经细胞 胞 胞 细胞周期 ~30min ~3h ~18h ~21h ～25h ~5d 孵育时间 5min 20min 2h 2h 2h