人参基因组DNA的提取及PCR鉴定.docVIP

学科前沿进展 题 目: 人参基因组 DNA 的提取及 PCR 鉴定 学 院: 专 业: 生物工程 班级:学号: 学生姓名: 吴 昌 文 导师姓名: 完成日期: 2011年 10月 20日 人参基因组 DNA 的提取及 PCR 鉴定 摘要:采用 CTAB 法对人参根须进行人参总基因组 DNA 的提取。根据琼脂糖凝胶电泳结果,优化 CTAB 提取法提取体系,建立最佳的人参总基因组 DNA 提取体系;利用经处理的人参总基因组 DNA 为模板,在 以 Gsp3/Gsp5为引物, 进行 PCR 的鉴定。 实验结果表明, 采用 3%CTAB提取液提取人参总基因组 DNA 效 果最佳;提取的 DNA 经 SDS 处理后作为模板,在以 Gsp3/Gsp5为引物, PCR 效果良好。 关键词:CTAB 法; PCR ;琼脂糖凝胶电泳 The extraction of the ginseng total genomic DNA and the identification of target gene by PCR Abstract :Using method of CTAB on ginseng roots extracts the ginseng total genomic DNA. According to results of the agarose gel electrophoresis, optimize the system of CTAB extraction buffer and establish the best system of extracting ginseng total genomic DNA; After processing extracted ginseng total genomic DNA, Use it as template and use Gsp3 / Gsp5 as primer to undertake PCR to identify the target gene; Experimental results show that the best system of extracting ginseng total genomic DNA is 3% CTAB extraction buffer; Use extracted ginseng total genomic DNA ,processed by SDS, as template and use Gsp3 / Gsp5 as primer to undertake PCR ,which has good results; Key words: method of CTAB; PCR; agarose gel electrophoresis 1 前言 1.1人参活性物质简介 人参(Panax gGinseng C. A Meyer是五加科人参属植物,人参的根被当作养生和治疗的药物, 有 2000多年的历史,见图 1。早在公元一世纪,我国最古老的医书 —— 《神农本草经》就对它的 效用作了记载。十八世纪,人参的效用被西方所认识,关于人参的研究有悠久的历史。 1 图 1 吉林长白山天然人参 近年来,由于生物化学与分子生物学的迅猛发展以及人参各种药理作用陆续被报道,人们对人 参的研究产生了新的兴趣 [1,2]。研究认为人参不仅对中枢神经、心血管、免疫、内分泌系统具有药理 作用,还表现出抗肿瘤、抗应激、抗氧化活性。尽管在古代,人参被认为是万能药,它的药理作用 被描述得十分神秘。然而,现代研究发现,大部分人参物种中的主要活性成分为人参皂苷、多糖、 肽、聚乙烯醇及脂肪酸。其中人参皂苷为主要药效成分。主要由人参二醇和人参三醇型皂苷组成, 属于异戊二烯单元构成的四环三萜达玛型化合物。主要分布根部,其次为茎和叶,目前已丛人参根 分离确定了结构的皂苷成分有 30余种。其中人参皂苷 Rg3、 Rh2、 Rg5、 compound K 具有显著抗肿 瘤、抗病毒活性;人参皂苷 Re 和 Rg2有较强的抗心律失常的活性;皂苷 Rg1和 Rb1是抗衰老的主要活 性成分和先导化合物。 1.2人参代谢途径研究概况 由于人参中各皂苷包括药理活性强的稀有皂苷在人参中含量甚微,加之由于人参皂苷化学结构 复杂,亦不能实现人参皂苷化学全有机合成 [3,4,5]。因此,人参植物或细胞中皂苷含量甚微所导致的 药用皂苷资源匮乏,已成为制约稀有人参皂苷新药规模化生产和开发的瓶颈。通过细胞培养技术大 幅度提高植物次生代谢产物的产量具有相当的发展潜力,随着分子生物学的发展,人们试图通过弄 清人参中萜类化合物的生物合成途径及关键酶,通过克隆人参中萜类化合物的生物合成途径关键酶 的基因,