环境微生物学-试验三培养基的制备与灭菌.docVIP

实验三：培养基的制备与灭菌 一、实验目的 1、熟悉玻璃器皿的洗涤和灭菌前的准备工作 2、明确培养基的配制原理。 3、掌握配置培养基和制备无菌水的一般方法和步骤。 4、掌握高压蒸汽的基本原理、应用范围和操作方法。 5、了解干热灭菌的原理和应用范围，学习干热灭菌的操作技术 6、了解过滤除菌和紫外线灭菌的原理 二、实验仪器和材料高压蒸汽灭菌锅、烘箱、电炉、天平； 药匙、剪刀、细铁丝、脱脂纱布、普通棉花、线绳、牛皮纸（或报纸）、记号笔； 酒精灯、pH精密试纸、洗液； 培养皿、试管、移液管、三角瓶、烧杯、漏斗、玻棒、量筒； 牛肉膏、蛋白胨、酵母粉、葡萄糖、蔗糖、可溶性淀粉、硫酸亚铁、硝酸钾、磷酸氢二钾、磷酸二氢钾、硫酸镁、氯化钠、孟加拉红（1%水溶液）、链霉素（1%水溶液）、10%HCl、10%NaOH、琼脂条（或琼脂粉）、马铃薯、蒸馏水。 三、实验原理 （一）培养基的分类 培养基是人工配制的适合微生物生长繁殖或积累代谢产物的营养物质，用以培养、分离、鉴定、保存各种微生物或积累代谢产物，同时也是微生物的繁殖基地。在自然界中，微生物种类繁多，营养类型多样，加之实验和研究的目的不同，所以培养基的种类很多。但是不同种类的培养基中一般应含有适宜的水分、碳源、氮源、无机盐类、生长因子等营养成分，这些营养物为微生物提供能源、组成细胞及调节代谢活动。不同微生物对pH要求不一样，霉菌和酵母的培养基的pH一般是偏酸性的，而细菌和放线菌的培养基pH一般为中性或偏碱性的（噬酸细菌和噬碱细菌除外）。所以配制培养基时，都要根据不同微生物的具体要求，将培养基的pH调到合适的范围。 根据微生物的种类和实验目的，培养基的类别如下： 1、按成分的不同分 （1）天然培养基 - 1 - 主要成分是复杂的天然有机物质，如马铃薯、玉米粉、豆饼粉、豆芽汁、牛肉膏、蛋白胨、血清等。这些复杂天然有机物质的成分不完全了解，每次所用的原料，其中各成分的数量也不恒定，这类培养基是实验室和发酵工厂常用的培养基，例如牛肉膏蛋白胨培养基、马铃薯培养基、玉米粉黄豆饼培养基、血琼脂培养基等。 （2）合成培养基 用化学成分完全了解的纯化合物药品配制而成的培养基，因此也称化学成分明确的培养基（chemically defined medium），如高氏Ⅰ号培养基、查氏培养基、M9培养基等，一般用于研究微生物的形态、营养代谢、分类鉴定、菌种选育、遗传分析等。 （3）半合成培养基 在以天然有机物作为微生物营养来源的同时，适当补充一些成分已知的化学药品所配制的培养基叫半合成培养基。大多数微生物都能在此种培养基上生长，应用广泛。例如常用的马铃薯葡萄糖培养基，很多霉菌都生长良好。 环境微生物学中，常在废水中补加少量氮、磷等物质来培养微生物，可认为是天然培养基或半合成培养基。 2、按培养基的物理状态分 （1）固体培养基 在液体培养基中加入凝固剂即为固体培养基。实验用的凝固剂有琼脂、琼脂糖、明胶和硅胶，后者用于配制自养微生物的固体培养基。对其他多数微生物来讲，以琼脂最为合适，一般加入1.5~2%即可凝固成固体。此培养基可供微生物的分离、鉴定、活菌计数、菌种保藏等用。 某些工农业生产废渣及生活废物可视为天然的固体培养基。 （2）半固体培养基 在液体培养基中加入少量凝固剂即为半固体培养基。例如用琼脂作凝固剂时只需加入0.3~0.5%。此培养基常用来观察细菌运动的特征、菌种保存和噬菌体的分离纯化及制备等。 （3）液体培养基 不含任何凝固剂，配好后成液体状态的培养基。广泛用于微生物的培养、生理代谢和遗传学的研究以及工业发酵等。 3、按培养基用途分 （1）基础培养基 含有一般细菌生长繁殖需要的营养物质。最常用的基础培养基是天然培养基中的牛肉膏蛋白胨培养基，这种可作为一些特殊培养基的基础成分。 （2）加富培养基（营养培养基） 在基础培养基中加入某些特殊营养物质，如：血液、血清、动植物组织液、酵母浸膏或生长因子等。用以培养对一营养要求苛刻的微生物，如培养百日咳杆菌需要含有- 2 - 血清的培养基。 （3）选择性培养基 利用微生物对某种或某些化学物质的敏感性不同，在培养基中加入这类物质，抑制不需要的微生物生长，而有利于所需分离的微生物生长，从而达到分离和鉴别某种微生物的目的。如分离真菌用的马丁氏（Martin）培养基和即有选择作用又有鉴别作用的远藤氏（Endo）培养基等。 选择性培养基在环境微生物学中应用较广，它是根据待培养的微生物的特殊营养要求或生理特征而设计的培养基，利用这种培养基可将所需要的微生物从环境混杂的微生物群中分离出来。如以纤维素为唯一碳源的培养基可以分离到纤维素分解菌；以石油为碳源的培养基可以分离到降解石油的微