2019年酶学分析技术.pptVIP

（二）常用指示酶及其指示反应 1 ．脱氢酶 用作工具酶的脱氢酶都是以 NAD(P)H 为辅酶的脱 氢酶，例如 LDH 、 MDH 、 G6PD 、 GLDH 等，它们催 化下列反应： P + NAD(P)H + H + ? PH 2 + NAD(P) + 可对 NAD(P)H 在紫外吸收或紫外激发荧光进行测定 ? 应用： ALT 、 AST 、 CK 等酶活性测定。 2 ．过氧化物酶 POD 可催化过氧化氢与某些色原反应，例如与 4- 氨 基安替比林（ 4-AAP ）和酚反应，将其氧化为有色物 质，反应如下： POD 2H 2 O 2 + 4-AAP + 酚 醌亚胺（红色） + 4H 2 O Trinder 反应： ? 应用 ： GOD 、 COD 、 GPO 、甘油氧化酶、尿酸酶（属于氧化酶 类）等都可以将各自的底物氧化为过氧化氢，因此都可以与 POD 偶 联，通过 Trinder 反应加以测定。 四、底物浓度测定 利用酶催化反应的高效率和专一性，可以测 定底物浓度。与酶活性测定类似。 ? 本章内容概要： 第一节 酶活性测定的基本知识 第二节 酶活性测定方法及酶学分析的类型 第三节 同工酶测定 第四节 酶学分析在临床诊断上的应用 第五节 酶活性测定最适条件的选择 1 、 掌握 酶活性的国际单位定义，酶活性浓度的表示方法及酶活性单位 的计算公式；酶活性测定的连续监测法和定时法的概念、区别和结果 的计算方法；酶偶联反应的在酶活性测定和酶法分析代谢物中的应用； 以 NAD （ P ） H 为指示系统和色素原底物在酶活性测定中的应用 . ? 本章教学要求： 2 、 熟悉 酶促反应进程；酶促反应底物动力学；酶学分析在临床诊断上 的应用。 3 、 了解 Km 值、 Vmax 值的应用及 Km 和 Vmax 的测定；同工酶测定和酶活性 测定最适条件的选择。 第一节 酶活性测定的基本知识 ? 酶活性的概念 ? 酶活性单位 ? 酶活性单位的计算 ? 酶促反应进程 ? 酶促反应底物动力学 一、酶活性的概念 酶活性 即酶促反应速度，指在规定条件下单位时 间内底物的减少量或产物的生成量。 底物浓度为〔 S 〕 , 产物浓度为〔 P 〕 , 时间为 t ，反应速度为 v v =-d 〔 S 〕 /dt 或 v =d 〔 P 〕 /dt 。 注：在实际测定酶促反应速度时，以测定单位时间内产物的 生成量为好。 二、酶活性单位 ? 定义： 指在一定条件下使酶促反应达到某一速度 时所需要的酶量。酶活性单位是一个人为规定的标 准。 ? 惯用单位 ： 酶活性测定方法的建立者所规定的单位。 ? 国际单位 ： 1IU 指在规定条件（最适 pH ，最适底物浓度）下， 每分钟转化 1 ? mol 底物的酶量。单位为 IU/L 。 ? Katal 单位 ： 1Katal 指在规定条件下，每秒钟转化 1mol 底物的 酶量， 1Katal=60 × 10 6 IU 。 三、酶活性单位的计算 ? 步骤： 运用公式进行计算。 明确测定方法的 酶单位定义 ，按照酶单位 定义确定物质量、体积和时间的单位， ? 计算公式 : 产物的增加量 每单位规定的保温时间 1000 （ ml ） 酶单位 / 升 = ————————— × —————————— × ———————— 每单位规定的产物增加量 实际保温时间 实际标本用量（ ml ） 分光光度法测定的公式： （ A 测定 – A 对照） · V 总 · 10 6 每单位规定的保温时间 酶单位 / 升 = ————————— × ———————— ? · L · V 标 实际保温时间 四、酶促反应进程 ? 酶促反应进程曲线 ? 酶量的测定： 通过酶活性测定间接测得酶的含量，因此，要准 确测定酶量，应使酶浓度（〔 E 〕）与酶促反应速度 成正比，即〔 E 〕∝ -d 〔 S 〕 /dt 或〔 E 〕∝d〔 P 〕 /dt 。 能够真正代表酶活性大小的是线性期的酶促反应速 度，即酶促