人教版高中生物选修一专题5课题1DNA的粗提取与鉴定优秀课件共23张 文档资料.ppt

1.DNA 的粗提取与鉴定 2. 多聚酶链式反应扩增 DNA 片段 3. 血红蛋白的提取和分离 DNA 和蛋白质技术 课题 1 DNA 的粗提取与鉴定 1 ，了解 DNA 的物理和化学性质 2 ，理解 DNA 粗提取和 DNA 鉴定的原理 ( 重点） 3 ，尝试粗提取植物和动物组织中的 DNA （难点） 利用 DNA 与 RNA 、蛋白质和脂质等在物理 和化学性质方面的差异，提取 DNA ，去 除其他成分。 一．基本思路 1. 分离原理 2. 不同浓度 NaCl 中 DNA 溶解度不同 二 . 实验原理 溶解规律 2 mol/L NaCl 溶液 0.14 mol/L NaCl 溶液 DNA 溶解 析出 蛋白 质 NaCl 溶液浓度从 2 mol/L 降 低的过程中，蛋白质溶解度 逐渐增大 部分发生 盐析沉淀 溶解 总结 ① DNA 和蛋白质等其他成分在不同浓度的 NaCl 溶液中溶解度不同。在 NaCl 溶液浓度低 于 0.14 mol/L 时， DNA 的溶解度随 NaCl 溶液 浓度的增加而逐渐降低；在 0.14 mol/L 时， DNA 溶解度最小；当 NaCl 溶液浓度继续增加 时， DNA 的溶解度又逐渐增大 ②选择适当的盐浓度就能使 DNA 充分溶解， 而使杂质沉淀，或者相反，以达到分离的目 的 蛋白质盐析与变性的三个“不同” (1) 两者特征不同：盐析是可逆的，属于物理变化；变性是 不可逆的，属于化学变化。 (2) 两者发生条件不同：氯化钠、氯化铵等盐浓溶液，可以 导致盐析； 高温、 强酸、 强碱、 重金属离子等， 能导致变性。 (3) 两者用途不同：盐析用于分离、提纯蛋白质等；变性常 用于杀菌、消毒等。 （ 1 ） .DNA 不溶于酒精，细胞中某些蛋白 质则溶于酒精。 （ 2 ） . 酶的专一性——蛋白酶水解蛋白 质，但对 DNA 没有影响。 2 ，提纯原理 (3). 蛋白质、 DNA 热稳定性不同。大多数蛋白 质不能忍受 60- 80℃的高温，而 DNA 在80 ℃以 上才会变性。 (4). 洗涤剂：能瓦解细胞膜，对 DNA 无影响。 3,DNA 鉴定原理 在沸水浴条件下， DNA 遇二苯胺被染 成蓝色。 三．实验设计 1. 实验材料的选取 选取 DNA 含量相对较高的生物材料，如鸡 血细胞。 本实验不能用哺乳动物成熟红细胞作实验 材料，原因是哺乳动物成熟红细胞无细胞 核。可选用鸡血细胞作材料。 2. 破碎细胞，获取含 DNA 滤液 动物细胞（鸡血细胞）加入一定量的蒸馏 水，同时用玻璃杯搅拌，使其吸水涨破，过滤 后收集滤液即可； 植物细胞需用洗涤剂瓦解细胞膜。如：提 取洋葱的时，在切碎的洋葱中加入一定的洗涤 剂和食盐，进行充分地搅拌和研磨，过滤后收 集研磨液。 3. 去除滤液中的杂质 酒精 静置 白色丝状物 玻璃棒 卷起丝状物 照实验 丝状物 对 的量浓度为 2 mol/L 物质 二苯胺 在沸水中加热 5 min 变蓝 4. DNA 析出与鉴定 为 2 mol/L 物质的量浓度 四 . 实验注意事项 1. 以血液为实验材料时，需在血液中加入柠 檬酸钠防止凝固。 2. 用洗涤剂处理植物细胞时动作要轻缓 ， 防止产生大量泡沫 。加入酒精后用玻璃杯搅 拌动作要轻缓，防止 DNA 分子断裂 ，不能形 成絮状沉淀。 3. 鉴定 DNA 用的二苯胺试剂要现配现用 ，否 则影响实验效果。 1 、 DNA 在不同浓度的 NaCl 溶液中溶解度不同，在 0.14mol/L 的 NaCl 溶液中溶解度最低 ( ) 2 、 DNA 不 溶 于 冷 酒 精 ， 可 用 酒 精 进 一 步 提 取 DNA( ) 3 、 DNA 与二苯胺溶液反应生成紫色物质 ( ) 4 、酵母和菜花均可作为提取 DNA 的材料 ( ) 5 、向鸡血细胞液中加蒸馏水搅拌，可见玻棒上 有白色絮状物 ( ) 6 、 DNA 溶液加入二苯胺试剂沸水浴加热，冷却后 变蓝 ( ) √ √ × √ √ × 课堂练习 7 、(2015·江苏改编 ) 图 1 、 2 分别为“ DNA 的粗提取与鉴定” 实验中部分操作步骤示意图，下列叙述不正确的是 A ．图 1 、 2 中加