3第六章 免疫比浊分析剖析.ppt

ARRAY 系统由分析仪、电脑处理系统、打印 机构成，其主要构成部分为分析仪，由加液 系统、散射测浊仪、 40 孔样本转盘、 20 孔试 剂转盘、软盘驱动器等组成。 2. 仪器基本组成 Array360 、 IMMAGE 特种蛋白分析分析系统 二、免疫比浊分析的主要影响因素 1 ． 抗原抗体比例 抗原抗体比例要适当。 2 ． 抗体的纯度与效价 诊断试剂应尽可能 选择高纯度与高效价的抗体。 3 ． 免疫复合物的大小及稳定性 溶液中免 疫复合物颗粒的分散度尽可能相同，颗粒应 该不容易相互聚集。 4 ． 增聚剂 利用增聚剂破坏抗原抗体的水化 层，促进反应的进行。 5. 离子强度 PBS 是较好的反应液 。 返回章目录 第六章 免疫比浊分析 ? 免疫比浊分析是将液相内的沉淀反应 与现代光学仪器和自动分析技术相结合的 一项分析技术。 第二节 自动化免疫比浊分析 第一节 免疫比浊的原理 一、透射免疫比浊法 二、散射免疫比浊法 三、免疫胶乳比浊法 四、免疫比浊分析的影响因素和临床应用 第一节 免疫浊度分析原理 抗原、抗体在特定的电解质溶液中反应，形成小 分子免疫复合物（ 19S ），在增浊剂（如 PEG 、 NaF 等） 的作用下，迅速形成免疫复合物微粒（ 19S ），使反 应液出现浊度。这种浊度可用仪器检测，用吸光度表 示。 第一节 免疫浊度分析原理 在抗体稍微过量且固定的情况下，形成的免疫复 合物量随抗原量的增加而增加，反应液的浊度亦随之 增大，即待测抗原量与反应溶液的浊度呈正相关。 免疫比浊技术分类： 透射免疫比浊法 （ turbidimetric immunoassay ） 散射免疫比浊法 （ nephelometry immunoassay ） 速率散射比浊法 终点散射比浊法 一定波长的入射光线通过抗原抗体反应后的溶 液时，由于 溶液 中的免疫复合物微粒对光线的吸收、 反射和折射而使透射光减少，可用 吸光度表示 。 在一定范围内，吸光度与免疫复合物量呈正相 关，而形成的免疫复合物量与参与反应的抗原和抗 体的量呈函数关系。 一、免疫透射比浊法 （一）原理： 抗原抗体反应曲线 1. 将待检标本和抗原参考品作适当稀释。 （二）操作方法 2. 将待测标本和标准抗原溶液（ 5 个浓度抗原标准 品）与适当过量的抗血清混合，在一定条件下，抗 原抗体反应完成后，在 340nm 处测定各管吸光度。 3. 按 log-logit 转换或 y=ax3+bx2+cx+d 方程进行曲线 拟合，制备剂量 - 反应曲线，由计算机处理，计算 出抗原浓度。 ? 待测的抗原抗体复合物分子量足够大。 ? 抗原抗体复合物数量足够多。 ? 具有充分的反应时间，只能测定抗原抗 体反应的第二阶段。 ? 高亲和力的抗体，并保证抗体过量。 （三）技术要求 （四）方法评价 优点 : 灵敏度高，稳定性好，操作简便，结果准确 不足 : ①抗体用量较大； ②溶液中存在的抗原－抗体复合物分子应足够大 ③透射比浊测定在抗原－抗体反应的第二阶段，检 测需在抗原抗体反应达到平衡后进行，耗时较长。 粒子对光线的散射作用是溶液中的微粒子受到 光线照射后，微粒子对光线产生反射和折射而形成 散射光。 悬浮微粒对光散射形成的散射光强度与微粒的 大小、数量、入射光的波长和强度、测量角度等因 素密切相关。 二、免疫散射比浊法 ( 一 ) 原理 不同大小的微粒形成的散射光分布不同。 当微粒直径小于入射光的波长的十分之一时， 散射光的强度在各个方向的分布均匀一致 ，称 Rayleighae 散射。 当微粒直径大于或等于入射光的波长时，前 向散射光远远强于后向散射光 ，称 Mile 散射。 其中光线偏转的角度与发射光的波长和抗 原抗体复合物的大小和多少密切相关。 当固定检测角度与发射光的波长时，散射 光的强度与复合物的含量成 正比 ，即待测的抗 原越多，形成的复合物越多，散射光就越强。 应选择 适当 的光源强度、反应时间、测量角 度及光源的波长。 另外，要注意保证抗原浓度合适。 此外