实验5 细菌的单染色和革兰氏染色.pptVIP

实验五 细菌的单染色和革兰氏染色 目 的 要 求 ? 学习对 细菌的涂片 、染色和 无菌操作技 术 。 ? 了解 染色原理 、学习并掌握 单染色 和 革 兰氏染色技术 。 实 验 原 理 微生物学中常用的是 单染色法 和 革兰氏染色法 。 单染色法： 是用一种染料使细菌着色以显示其形态，不能辨 别细菌细胞的构造，通常采用 碱性染料 （如 美蓝、结晶紫、碱性 复红 等）使其着色。 当在中性、弱碱性、弱酸性溶液中，细菌细胞通常带负电荷。 而碱性染料在电离时，其分子的染色部分带正电荷， 因此碱性 染料的染色部分很容易与细菌结合使细菌着色。 革兰氏染色法： 是 1884 年由丹麦病理学家 C.Gram 所创立的。是 细菌学上最常用的鉴别染色法。该染色法所以能 将细菌分为 G + 菌和 G — 菌 ，是由这两类菌的细胞壁结构和成分的不同所决定的。 实 验 原 理 实 验 材 料 ? 菌种： E.coli （大肠杆菌） 、 B.subtilis （枯草芽孢杆菌） 或实验室所培养杂菌 ? 试剂： 石炭酸复红染色液、革兰氏染色液 ( 草酸铵结晶 紫、碘液、 95% 乙醇、沙黄 / 番红染色液 ） ? 其他： 显微镜、载玻片、生理盐水、酒精灯、接种环、 吸水纸、擦镜纸等 实 验 程 序 一、单染色法： 涂片 → 干燥固定 → 染色 → 水洗 → 干燥 → 镜检 （高倍镜、油镜） 二、革兰氏染色： 涂片 → 干燥固定 → 结晶紫初染 → 水洗 → 碘液媒 染 → 水洗 → 酒精脱色 → 水洗 → 沙黄复染 → 水洗 → 干 燥 → 镜检 1. 洗净载玻片 ：先将载玻片洗净，擦干。 2. 涂片： 取干净载玻片一块，在载玻片中央加一滴蒸馏水 ( 生理盐水 ) ，按无菌操作法取样品菌涂片，做成菌悬液。 （ 讨论： 取菌多少对结果的影响？ ） 3 . 晾干： 让涂片自然晾干或者在酒精灯火焰上方文火烘干。 4. 固定 ：手执玻片一端，让菌膜朝上，通过 火焰 2-3 次固 定 （以不烫手为宜）。 （ 讨论： 固定的目的？ ） 单染色法 5. 染色： 将固定过的涂片放在废液缸上的搁架上，加复红 染 色 1-2min 。 6. 水洗： 用水洗去涂片上的染色液。 7. 干燥： 将洗过的涂片放在空气中晾干或用吸水纸吸干。 （ 讨论： 干燥的目的？ ） 8. 镜检： 先低倍观察，再高倍观察，最后用油镜。 单染色法视频 ? 1. 涂片 - 干燥 - 固定 2. 初染 ： 在做好的涂面上滴加 草酸铵结晶紫染液 ， 染 1- 2 分钟 ，倾去染液，流水冲洗至无紫色。 ? 3. 媒染 ： 先用新配的 碘液 冲去残水，而后用其覆盖涂面 1 分钟 ，后水洗。 革兰氏（ Gram ）染色法： ? 4. 脱色 ： 除去残水后，滴加 95% 酒精 进行脱色约 25 秒左右 ， 后立即用流水冲洗 ? 5. 复染 ： 滴加 番红染色液 ，染 2 分钟 ，水洗后用吸水纸吸 干。 ? 6. 镜检 ： 观察染色结果并绘图。 革兰氏（ Gram ）染色视频