测量蛋白质含量的方法.docVIP

蛋白质含量测定 蛋白质含量测定方法，是生物化学研究中最常用、最基本的分析之一。目前常用的方法有凯氏定氮法(Kjedahl）、双缩脲法(Biuret)、紫外吸收法、考马斯亮蓝法(Bradford)。其中Bradford法灵敏度最高，比紫外吸收法灵敏10~20倍Biuret法灵敏100倍以上。 凯氏定氮法虽然比较复杂，但较准确，往往以定氮法测定的蛋白质作为其他方法的标准蛋白质。 凯氏定氮法 1．1 原理 凯氏定氮法测定蛋白质分为样品消化、蒸馏、吸 收和滴定4个过程。其原理是样品中含氮有机化合物与浓硫酸在催化剂作用下共热消化，含氮有机物分解产生氨，氨又与 — 酸作用，变成硫酸铵。然后加碱蒸馏 放出氨，氨用过量的硼酸溶液吸收，再用盐酸标准溶液滴定求出总氮量换算为蛋白质含量。 1．2 特点 凯氏定氮法是目前分析有机化合物含氮量常用的方法，是测定试样中总有机氮最准确和最简单的方法之一，被国际国内作为法定的标准检验方法。该凯氏定氮法适用范围广泛，用于标准蛋白质的准确测定，干扰少，干扰是非蛋白氮（可用三氯乙酸沉淀蛋白质而分离）测定结果准确，重现性好，但操作复杂费时，试剂消耗量大。费时太长，通常8-10个小时，灵敏度低，测定范围是0.2-1.0mg。 双缩脲法 2．1 原理 双缩脲(N}I3C0NHC0NH 是两个