生理生化鉴定技术.ppt

项目五 生理生化鉴定技术 糖发酵试验是最常用的生化反应，在肠道细菌 的鉴定上尤为重要。绝大多数细菌都能利用糖类作 为碳源和能源，但是它们在分解糖的能力上有很大 差异，有些细菌能分解某种糖并产酸（如乳酸、醋 酸、丙酸等）和气体（如氢、甲烷、二氧化碳 等）；有些细菌只产酸不产气。 例如： 大肠杆菌能分解乳糖和葡萄糖产酸并产气； 沙门氏菌只能分解葡萄糖，产酸不产气，而不能分 解乳糖。 项目实训任务单 实践操作 问题探究 知识拓展 实践操作 ⑴编号 用记号笔在各试管上分别标明发酵培养基名称和所接种的菌名。 ⑵接种 取盛有葡萄糖发酵培养基的试管3支，按编号1支接种大肠杆菌，另1支接种普通变形杆菌，第3支不接种，作为对照。另取乳糖发酵培养基试管3支，同样1支接种大肠杆菌，1支接种普通变形杆菌，第3支不接种，作为对照。 ⑶将上述已接种的葡萄糖和乳糖发酵试管和对照管置37℃温室中培养24小时。 ⑷观察结果。 问题探究 1、结果判定 ⑴变色 培养基遇酸变色则为阳性（+） 培养基不变色则为阴性（-） ⑵气体 若有气体产生，则倒立小管出现气泡 ⑶动力 若接种菌有动力，培养物沿穿刺接种线呈弥 漫生长 左边两根试管为（+）右边两根试管为（-） 2、在放置德汉氏小管时注意不能有气泡，防止影响后面观察。 3、其他糖（醇）类发酵试验结果 知识拓展 1、常规的生理生化鉴定试验 不同种属的微生物其酶系统、代谢途径和代谢产物的差异较大，这就为微生物的理化鉴定提供了方便。实践中常通过一些特殊的反应来测定某种产物或酶，如乙酰甲基甲醇试验、甲基红试验、硫化氢生成、过氧化氢酶产生试验等，依据试验结果则可将不同的微生物区别开来。在微生物鉴定中，一般先根据几项简单的性质，如微生物要求的培养条件、要求的培养基、是否产生色素等，来判断所鉴定的微生物属于哪一大类，然后全面考察这一大群内各属间的异同，选择合适的鉴别特征，制定出鉴定方案。鉴别到属后，再依据各种间的异同，进一步鉴定到种。 总的来讲，微生物的理化鉴定技术包括生长环境特性试验（生长温度测定、生长pH测定等），营养物质利用能力试验（碳源的利用试验，氮源的利用试验等），代谢产物试验（乙酰甲基甲醇试验VP，硫化氢的生成试验，吲哚试验，甲基红试验MR，淀粉水解试验，明胶液化试验等）。 2、微生物生理生化特性也被作为细菌鉴定和分类的内容 微生物的分类鉴定除了利用我们前面所提到的形态特征，培养特征，生理生化特征外，还包括微生物的生态特性，化学组成，血清学反应，遗传学特性等，都可作为分类的依据。例如霉菌的细胞壁主要含有几丁质,而细菌细胞主要是肽聚糖等；根据血清学反应的基本原理,用已知菌种、菌型制成抗血清,然后根据它们与待鉴定微生物是否发生特异性的血清学反应,来确定未知菌种或菌型；随着分子生物学的发展和先进技术的应用,微生物的脂肪酸组成、磷脂质组成、细胞色素、酶和蛋白质的电泳图谱、DNA的碱基组成、5S核糖体RNA序列等也都作为微生物的分类依据。 分类和鉴定 分类：是解决从个别到一般或从具体到抽象的问题，亦即通过收集大量有关个体描述的资料，经过科学的归纳，整理成一个科学的分类系统。 鉴定：其和分类正好相反，是从一般到特殊或抽象到具体的过程，亦即通过详细观察和描述一个未知名称纯种微生物的各种性状特征，然后查找现成的分类系统，以达到知类辨名的目的。 微生物分类和命名简介(一)种以上系统分类单元 （二）种的概念 定义：种是一个基本分类单位，是一大群表型特征高度相似、亲缘关系极其接近、与同属内其他种有明显差异的菌株的总称。在微生物中，一个种只能用该种内的一个典型菌株作为具体标本，它就是该种的模式种。(例如：Bifidobacterium bifidum, ATCC 29521) （三）学名 命名的方法：国际法规命名，即林奈所创立的双名法。 双名法的规则：学名通常由一个属名加一个种的加词构成。由两个拉丁字或希腊字或拉丁化了的其它文字组成，属名在前，为名词，开头字母大写，是该微生物的主要特征。种名在后，为形容词，开头字母小写。两者均须斜体。 5. 菌株（strain） 微生物鉴定技术简介  * * 不同种属的微生物其酶系统、代谢途径和代谢产物的差异较大，这就为微生物的理化鉴定提供了方便。实践中常通过一些特殊的反应来测定某种产物或酶，如乙酰甲基甲醇试验、甲基红试验、硫化氢生成、过氧化氢酶产生试验等，依据试验结果则可将不同的微生物区别开来。 在微生物鉴定中，一般先根据几项简单的性质，如微生物要求的培养条件、要求的培养基、是否产生色素等，来判断所鉴定的微生物属于哪一大类，然后全面考察这一大群内各属间的异同，选择合适的鉴别