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（并购重组）重组质粒GE 重组质粒 pGEX-6P-1/Sj-FABPc 的构建 及在大肠杆菌中的表达 1 2 2 2 2 赵巍 苏川 吴海玮 胡雪梅 沈蕾 2 2 2 王荣芝 马磊 陈淑贞SUP.2sup张兆松 【摘要】目的构建基因工程菌株，获得重组蛋白Sj-FABPc （日本血吸虫脂肪酸结合蛋白）。方法 用PCR 法从日本血吸虫 cDNA 文库中扩增Sj-FABPc 基因片段，再将该片段重组于 pGEM-T 中并进行 DNA 测序鉴定 .经酶切后将目的片段构建成重组质粒 pGEX-6P-1/Sj-FABPc,转化于大肠杆菌 BL21,IPTG 诱导表达。用 GlutathioneSepharoseTM4B 亲和层析柱对表达产物进行纯化， PreScissionTMProtease 酶对融合蛋白进行解离，获得纯化的 14kDaSj-FABPc 。SDS和 Westernblot 方法对表达产物进行鉴定。结果获得 pGEX-6P-1/Sj-FABPc 菌株，分离纯化出 14kDaSj-FABPc ，表达量为10.52mg/L 。Westernblot 显示，表达蛋白能被日本血吸虫免疫兔血清 识别。结论重组蛋白 Sj-FABPc 可高效表达并有良好的抗原性。 【关键词】日本血吸虫；脂肪酸结合蛋白；基因克隆；重组抗原；融合表达 CONSTRUCTIONOFRECOMBINANTpGEX-6P-1/Sj-FABPcANDEXPRESSIONINE.coliZhaowei1SuChuan2WuHa iwei2HuXuemei2ShenLei2ZhangZhaosong2etal1DepartmentofBiology,NingxiaMedicalCollege,Y inchuan7500042InstituteofMedicalMolecularBiology,NanjingMedicalUniversity,Nanjing210 029 【 Abstract】 ObjectiveToobtainrecombinantproteinSj-FABPcbygeneengineering.MethodsThegenefragmento fSj-FABPcwasamplifiedbyPCRfromtheadultwormcDNAlibraryofSchistosomajaponicumandthensu bclonedintopGEM-Tvector.Thegenesequencewasidentifiedandthetargetfragmentwasrestricte dlydigestedandsubclonedintoexpressionvectorpGEX-6P-1.Theproteinisexpressedandcharact erized.ThefusionproteinwaspurifiedbychromatographyusingGlutathionSepharoseTM4Bandwas digestedbythePreScissionTMProtease.The14kDaSj-FABPccanbeobtained.TheantigenicityofrS j-FABPchasbeendemonstratedbyWesternBlot.ResultsThepGEX-6P-1/Sj-FABPcwasconstructedan dexpressedasrSj-FABPcinE.coliBL21,theyieldofwhichwasaround10.52mg/L.TherSj-FABPccanb erecognizedbytherabbitserumwithSchistosomajaponicuminfectionusingwesternblotting.Con clusionsTherecombinantfusionproteincouldbeexpressedefficientlyandhadgoodantigenicity . 【 Keywords】 Schistosomajaponicum,Fattyacidbindingprotein(FABP),geneclon